05),与此对应的是增加成纤维细胞标志物α-SMA、desmin和vimentin的表达(p<0.05)。TGF-β1显著增加A549细胞磷酸化的p38MAPK和磷酸化的JNK蛋白的表达(p<0.05);JNK的特异抑制剂SP-600125和p38MAPK特异抑制剂SB-203580,均可以抑制A549细胞向间质细胞转分化,显著抑制(p<0.05)TGF-β1诱导的A549细胞α-SMA、结蛋白和波形蛋白表达,与此对应的是可阻止(p<0.05);p38MAPK和JNK基因沉默均可以抑制A549细胞向间质细胞转分化,可以显著抑制TGF-β1诱导的A549细胞α-SMA、结蛋白和波形蛋白表达(p<0.05),与此对应的是可阻止TGF-β1诱导的A549细胞E-钙粘素、ZO-1和AQP-5减少(p<0.05)TGF-β1诱导的A549细胞E-钙粘素、ZO-1和AQP-5减少,显著减少活性MAPK蛋白(磷酸化的JNK和磷酸化的p38MAPK)的表达(p
传统的观念认为病理性血管重构的发生是一个“由内而外”的过程，由内管内皮细胞损伤始动，继而血管平滑肌细胞(vascular
所以 smooth muscle cells，VSMCs)增殖，并合成、分泌大量细胞外基质(extracellular matrix，ECM)蛋白，最终导致血管结构和功能的改变。然而，通过抑制内皮损伤和对抗VSMCs增殖来进行的治疗性研究并没有完全阻断病理性血管重构的发生。近年来，血管外膜在血管重塑中的作用越来越受到人们的重视，并且提出“由外而内”的血管损伤重构假说，其中心观点认为血管损伤发生后，外膜是血管壁的第一感知部位。无论血管损伤是否累及外膜(严重与否)，对损伤反应活跃的细胞最先出现于血管外膜。血管外膜成纤维细胞(adventitial
fibroblasts，AFs)是血管外膜中最主要的细胞成分，其在各种病理性损伤刺激下转化为肌成纤维细胞(myofibroblasts，MFs)，MFs是一种具有平滑肌细胞特征的成纤维细胞，表达平滑肌肌动蛋白-α 更多 (smooth muscle α-actin，α-SMA)，可以产生ECM和多种生物活性因子，MFs增殖并迁移至中膜和内膜，参与新生内膜形成及血管重塑过程。 E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes，CREG)是一个新近发现的血管稳态调控因子，其在成熟分化的组织和细胞中广泛表达，但在去分化组织或细胞，如鼠胚胎干细胞、人畸胎瘤细胞、造血干细胞和去分化表型VSMCs中却呈明显低表达或无表达状态。CREG可直接与外源性腺病毒蛋白E1A及哺乳动物体内转录因子E2F家族蛋白竞争性地结合在靶基因的启动子上，从而阻遏E1A和E2F对靶基因的激活作用，因而推测CREG可能通过与E1A、E2F竞争性抑制作用而起到促进细胞分化、抑制细胞增殖的作用。研究发现，在无特异性诱导剂存在的情况下，CREG仍可以单独诱导体外培养的畸胎瘤细胞向神经细胞分化。另外，CREG还具有维持心肌细胞和小肠上皮细胞成熟稳态、对抗病理性细胞损伤发生的生物学功能。本实验室前期系列研究证实，CREG基因在成熟分化的VSMC中大量表达，能够维持VSMC分化、阻遏在体损伤后VSMC向去分化表型转化并抑制新生内膜形成。因此，CREG是参与维持组织及细胞成熟分化稳态的重要调控因子。 3-MA溶解度 丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPKs)信号转导通路是生物体内广泛存在的一类丝/苏氨酸蛋白激酶，参与介导细胞生长、发育、分裂和分化等多种生理及病理过程。在哺乳动物细胞中MAPKs亚族主要包括细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular
signal regulated protein kinase1/2，ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Junamino-terminal kinase1/2，JNK1/2)和p38-MAPK。我们研究室前期在研究CREG调控人VSMCs凋亡过程时发现，CREG过表达通过抑制JNK1/2和p38-MAPK信号转导通路的激活来阻止药物诱导的离体培养的人VSMCs凋亡，同时，外源性添加CREG蛋白也能够抑制JNK1/2和p38-MAPK信号转导通路的激活来缓解球囊损伤诱导的人冠状动脉血管中VSMCs的凋亡。另外，关于CREG基因的其他研究小组也相继证实，CREG抑制心肌肥厚、纤维化和炎症作用的机制与ERK1/2信号转导通路密切相关。综上所述，CREG可作为MAPKs信号转导通路的上游调控子来影响多种组织细胞的生物学行为。 本研究拟在整体和细胞两个水平复制AFs细胞表型转化模型，运用形态学、细胞生物学、分子生物学等技术，围绕血管损伤后CREG基因表达对血管外膜增生、AFs细胞表型转化，以及MAPKs信号转导通路在其中发挥的调控作用等方面的问题进行研究，以期通过阐明CREG基因对AFs细胞表型转化的调控作用及其机制，为拓展防治血管重塑性疾病的新思路奠定基础。 本课题的主要研究内容和结果如下： 1.