、动物实验动物分为对照组、模型组及治疗组,每组10只。采用皮下注射野百合碱建立肺动脉高压模型。正常对照组注射同等剂量生理盐水,L-精氨酸治疗组在野百合碱皮下注射后第2天开始给药,按100mg/kg剂量每日腹腔注射。每周监测尾动脉压,四周后颈外静脉插管检测肺动脉压力及右心室功能,并检测肺动脉舒张功能。高效液相色谱法检测血浆ADMA浓度；硝酸还原酶法测定血浆中NO浓度；RT-PCR法检测肺组织DDAH2mRNA的表达；免疫组化法检测肺动脉DDAH2蛋白的表达。 结果1、肺心病患者血浆ADMA浓度显著高于正常对照组(0.41±0.09vs 0.22±0.07μM,P<0.05);右心室肥厚明显(右心室／左心室+室间隔质量比(41.7%±6.6%vs26.3%±4.8%,P<0.05),血浆NO含量显著降低(23.4±3.5vs31.2±2.1)。L-精氨酸治疗后血浆ADMA浓度降低(0.28±0.08vs0.41±1.0μM,P<0.05)；血浆NO水平升高(29.1±3.1vs23.4±3.5μM,P
神经节苷脂(Gangliosides)是一类含唾液酸的鞘糖脂，存在于细胞膜的外表面。在胚胎形成、细胞分化、细胞增殖、转化和细胞转移等生理现象中发挥着重要作用。本文阐述了神经节苷脂GD1a的一种新的功能即诱导FBJ病毒感染的小鼠骨肉瘤细胞产生凋亡。在无血清培养条件下，富含GD1a的FBJ-S1细胞趋向死亡，而缺乏GD1a的FBJ-LL细胞却却未见明显影响。通过流式细胞仪对细胞进行膜联蛋白V异硫氰酸荧光素(FITC-AnnexinV)和碘化丙啶(PI)双染检测和细胞周期分析发现FBJ-S1细胞在无血清条件下趋向死亡是因凋亡而引起的。因此，我们推测GD1a可诱导FBJ细胞凋亡。为了验证这一推论，外源性GD1a在无血清培养条件下处理FBJ-LL细胞，发现FBJ-LL细胞出现死亡。FBJ-S1细胞通过加入葡萄糖苷神经酰胺合成酶抑制剂(D-PDMP)处理和转染入唾液酸转移酶(st3ga15)的siRNA的来抑制GD1a的合成，发现在无血清条件下经D-PDMP处理后FBJ-S1细胞抵抗死亡，且转染siRNA到FBJ-S1细胞后得到的单克隆细胞也同样抵抗死亡。另外，很多文章报道神经酰胺和神经节苷脂GD3可诱导凋亡，但在发生凋亡的FBJ细胞中神经酰胺的表达含量并没有变化，而GD3并未见在FBJ细胞中表达，这说明神经酰胺和GD3不是引起FBJ细胞凋亡的因素。

许多 PLX3397分子量 窖蛋白1(caveolin-1，亦译为小窝蛋白1)是一种肿瘤抑制蛋白。本文研究发现，窖蛋白1参与了GD1a诱导的FBJ细胞凋亡并起着关键作用。FBJ-S1细胞在无血清条件下趋向死亡，而FBJ-LL细胞并未出现此现象，逆转录PCR法检测发现FBJ-S1细胞中窖蛋白1的表达量是FBJ-LL细胞的5倍。FBJ-LL细胞在外源性GD1a处理后促进其趋向死亡，免疫印迹法(Western blot)发现窖蛋白1的表达量也明显增加。另外，利用siRNA技术沉降FBJ-S1细胞中窖蛋白1的表达量，无血清培养条件下，结果使其存活。数据表明窖蛋白1可促进FBJ细胞的凋亡。存活蛋白(survivin，亦译为生存蛋白或生存素)是一种凋亡抑制蛋白，研究发现窖蛋白1可以调节存活蛋白，且存活蛋白也参与了GD1a诱导的FBJ细胞凋亡。生长因子。因此我们随机检测了FBJ-LL和FBJ-S1细胞中一些生长因子的mRNA水平表达，发现FBJ-LL细胞中生长因子如PDGFα，TNFα和VEGFβ的表达量是FBJ-S1细胞中的数倍，且FBJ-S1细胞在无血清培养基中加入PDGFα或TNFα培养后使其存活。数据表明内源性GDla可调节生长因子的表达同时也可诱导凋亡。另外，通过信号传导抑制剂和细胞内吞抑制剂来研究GDla诱导FBJ细胞凋亡的机制，发现p38MAPK途径和细胞内吞途径对GDla诱导的细胞凋亡发挥着重要作用。
目的建立小鼠内毒素(即脂多糖,LPS)急性肺损伤(ALI)模型,动态观察槐定碱对小鼠内毒素性肺损伤模型的治疗作用,研究槐定碱对LPS信号转导途径中的识别受体-LBP、CD14、TLR4、胞内p38MAPK信号分子、核转录因子AP-1及主要炎症介质TNF-α、NO四个层次的影响,以探讨其抗内毒素的药理机制。 方法BALB/c小鼠随机分为6组,即正常对照组、内毒素肺损伤模型组、槐定碱治疗组[槐定碱高(12mg/kg)、中(6mg/kg)、低(3mg/kg)三个剂量]、槐定碱药物对照组(12mg/kg)。每组小鼠再分为2h、6h、12h、24h四个时相。以尾静脉注射内毒素7mg/kg制备急性肺损伤小鼠模型。各组小鼠分别在给予LPS或槐定碱后相应时间点,即2h、6h、12h、24h时记录一般状况并取材,肉眼及光镜观察肺组织的病理变化;以肺湿/干重(W/D)比值检测肺水含量;硝酸还原酶法测定血清一氧化氮(NO)含量;放射免疫分析法检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织中LBP、CD14、TLR4、c-jun、c-fos及TNF-α的mRNA表达水平;免疫组化SP法与免疫印迹法(Western-blot)检测肺组织中总p38MAPK、磷酸化p38

为什么 MAPK、TLR4蛋白的表达水平。 结果(1)内毒素肺损伤模型组小鼠在给予LPS后30分钟即有症状出现,至24h未见缓解;肉眼与光镜观察肺脏病理改变,发现6h起肺脏病理改变明显可见并逐渐加重,延至24h亦未见减轻;模型鼠肺组织W/D值显著升高;血清TNF-α和NO值均在给予LPS后2h即显著升高,并分别在6h和12h达到高峰,直至24h仍明显高于正常对照组(P <0.01)。模型组肺组织LBPmRNA、CD14mRNA与TLR4mRNA表达均在2h开始上调,于6h达高峰,至24h仍维持高水平。TLR4蛋白表达趋势与TLR4mRNA大致相似。免疫组化检测模型组各时相点的p38阳性细胞主要分布在气道黏膜上皮细胞、浸润的炎细胞和血管内皮细胞的胞浆中;磷酸化p38在上述细胞的胞浆与胞核中均呈强阳性表达,阳性细胞数和阳性信号均较正常对照组明显增多和增强,各时相点记分值均显著高于同时相点正常对照组(P<0.01或P<0.