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“全髋关节置换术后金属-金属人工关节在机体中可发生磨损与腐蚀,产生磨损颗粒并释放出金属离子,大量金属离子可随体液分布于全身。成骨细胞在骨形成过程中起重要作用,如合成Ⅰ型胶原,调节骨有机质形成;分泌成骨性和溶骨性细胞因子(巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素-6、骨保护素、核因子-κB受体活化因子配体等),影响成骨细胞或破骨细胞的分化与功能。金属离子对成骨细胞可产生细胞毒性作用,影HIF抑制剂响成骨细胞扩增、迁移及细胞因子分泌,导致骨形成与骨溶解失衡而影响骨重建,并进一步影响人工关节与骨的整合。金属离子对成骨细胞生物学影响的机制目前尚不明确,可能与氧化应激、细胞外信号调节激酶等信号通路有关。”
“背景:近年来的研究表明核转录因子κB通过调控多种基因的表达,参与细胞生长、发育、凋亡等多种生理功能,并在细胞恶性转化、纤维化等方面起重要作用。核转录Angiogenesis抑制剂因子κB抑制蛋白激酶(inhibitor of kappa B kinase,IKK)β是核转录因子κB激活通路中的关键激酶,被抑制后可以阻断核转录因子κB的活化过程,通过siRNA干扰沉默IKKβ基因,下调核转录因子κB。目的:体外合成并筛选人瘢痕疙瘩成纤维细胞特异性IKKβ-siRNA,并构建其表达载体。设计、时间及地点:细胞观察实验,于2008-04Selleckchem IBET762/2008-10在解放军广州军区总医院中心实验室完成。材料:细胞来源为珠江医院整形外科25～40岁患者切除的瘢痕疙瘩标本,患者知情同意。方法:化学合成3条IKKβ-siRNA,分别转染体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,采用反转录-聚合酶链反应技术检测所合成的SiRNA对IKKβ表达的抑制,筛选出特异性IKKβ-siRNA,并采用PU6质粒构建载体。主要观察指标:①RT-Q-PCR检测结果。②载体基因连接产物酶切鉴定。③重组质粒测序鉴定。