将稳定表达rh-K5的MDA-MB-231细胞培养上清作用于BCE和ECV304细胞后,对两者增殖有抑制作用,而其自身的增殖无明显

将稳定表达rh-K5的MDA-MB-231细胞培养上清作用于BCE和ECV304细胞后,对两者增殖有抑制作用,而其自身的增殖无明显影响;将pcDNA3K5与pShuttle重组得到的克隆pShttleK5与复制缺陷型腺病毒DNA重组,转化DH5α得到重组克隆pAd-K5,转染HEK293细胞,在其中包装、扩增后制备Ad-K5,将其感染BCE、ECV304细胞和MDPD0325901A-MB-231细胞,对BCE和ECV304细胞增殖有抑制作用,并抑制BCE和ECV304细胞形成毛细血管样管腔结构,对MDA-MB-231细胞增殖无明显影响。 三、 人纤溶酶原K5 结构域基因转染动物实验 将稳定表达rh-K5的MDA-MB-231细胞在体外培养、扩增后接种至BALB/c nu/nu裸小鼠皮下,制备裸鼠乳腺癌模型,观察转Staurosporine半抑制浓度染pcDNA3K5对肿瘤生长的影响,测肿瘤体积,绘制生长曲线,接种后30d,处死动物,测瘤重,RT-PCR检测K5 mRNA表达;免疫组化:VIII因子相关性抗原(factor VIII related antigen, FVIIIRAg)标记血管内皮细胞,计数肿瘤微血管,检测血管内皮生长因子(vascular endothelial g所以rowth factor, VEGF)、凋亡相关蛋白Bcl-2和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)的表达。 与未转染和转染pcDNA3的MDA-MB-231细胞比较,转染pcDNA3K5的MDA-MB-231细胞在裸小鼠皮下生长延缓,肿瘤体积较小,瘤重较轻,其差别有统计学意义(P 降低(P0.05),说明rh-K5通过抑制肿瘤新生血管生成抑制肿瘤生长。

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