研究方法1.实验方法1.1、AHL对成骨细胞凋亡的影响1.1.1不同浓度AHL(10、20、30、40、50μM)作用MC3T3-E1细胞1、3、5 d,显微镜拍照观察细胞形态,CCK-8检测细胞活性。1.1.2不同浓度AHL作用MC3T3-E1细胞24 h,TUNEL(Terminal Deoxynucleotidyl Transfera更多se-mediated d UTP Nick-End Labeling)法荧光标记凋亡细胞,荧光显微镜检测凋亡细胞并统计每mm2凋亡细胞数。1.1.3 AHL(50μM)作用MC3T3-E1细胞1、3、6、12、24 h或用不同浓度的AHL作用MC3T3-E1细胞3 h,Western blotting检测CleaEvofosfamideDMSO溶解度ved-Caspase-3和CleavedPARP的蛋白表达。1.1.4红色线粒体荧光染料预染MC3T3-E1细胞线粒体,再加入绿色荧光标记的AHL(30、50μM)作用15 min,使用共聚焦激光扫描显微镜系统观察AHL与线粒体的共定位情况。1.1.5 AHL(30、50μM)作用MC3T3-E1细胞15 min无,采用JC-1荧光探针检测线粒体膜电位。1.1.6红色线粒体荧光染料预染MC3T3-E1细胞线粒体1 h,加入AHL(30、50μM)作用3 h,再行细胞色素c荧光染色,使用共聚焦激光扫描显微镜系统观察细胞色素c由线粒体到胞质的异位情况。1.1.7 AHL(30、50μM)作用MC3T-E1细胞3 h,分离线粒体及胞浆蛋白,Western blotting检测细胞色素c蛋白在线粒体和胞浆中的表达。