结果显示,TGFα中和抗体与EGF的混合液并未影响EGF受体和ERK1/2的磷酸化水平,说明TGFα中和抗体与EGF并未发生特异性的交叉反应。 3) TGFα与细胞增殖的时效关系 在EGF刺激细胞后不同时间加入TGFα抗体中和培养液中细胞分泌的TGFα, EGF刺激30小时后使用放射渗入法检测各组细胞的增殖水平。结果显示,在EGF刺激细胞1小时前或第12小时使用TG可能Fα中和抗体,肝细胞增殖将会完全受到抑制,而在第24小时使用TGFα中和抗体,则细胞增殖受到部分抑制。说明细胞分泌的TGFα主要在EGF刺激细胞12小时后起作用,与P53促进细胞增殖具有相同的时效关系,提示P53通过TGFα促进细胞增殖。 3.3TGFα促进细胞增殖的机制 1) TGFα促进Cyclin D表达 TGFα促进细胞增殖的作用主不要发生在EGF刺激细胞12小时后,因此在EGF刺激细胞12小时后加入培养液TGFα中和抗体,在24小时和30小时收获细胞。结果显示,TGFα中和抗体抑制Cyclin D的表达,说明细胞分泌的TGFα起到促进Cyclin D表达的作用。证实了P53抑制Cyclin D的表达是通过TGFα实现的。 2) TGFα促进Cyclin D细胞核内分布selleck激酶抑制剂 Cyclin D的功能也依赖其在细胞内的分布,当EGF刺激细胞30小时后,Cyclin D和CDK4均位于细胞核内,而如果不给予细胞EGF刺激,则Cyclin D和CDK4均位于细胞质内。当使用鼠源性的TGFα单克隆抗体中和培养液中细胞分泌的TGFα后,Cyclin D口CDK4与不给予EGF刺激细胞的情况相似,仍位于细胞质中未进入细胞核内,说明细胞分泌的TGFα起到促进Cyclin D和CDK4细胞核内聚集的作用。