采用Bandleader3.0软件分析目的条带和内参照条带的灰度比值。 4APS对Hepcidin表达的影响 分别提取各组细胞和小鼠肝脏组织总蛋白并定量,通过Western blotting方法检测Hepcidin的表达,通过Bandscan5.0软件分析Western blotting条带灰度与内参照条带灰度比值。 5血清铁及小鼠肝脏、脾脏和心脏中铁含量的检测 DNA Methyltransferase 抑制剂 nmr 制备小鼠血清,送新乡医学院第三附属医院检验科,采用多功能全自动生化分析仪检测血清铁。取新鲜肝、脾、心脏组织,通过空气-乙炔原子吸收法测定小鼠肝、脾和心脏中铁含量。 6黄芪多糖上调Hepcidin的机制 分别提取各组细胞和小鼠肝脏组织总蛋白并定量,通过Western

blotting方法检测P38、p-P38、IL-1、IL-6和TNF-α的表达,通过Bandscan5.0软件分析Western blotting条带灰度与内参照条带灰度比值。 7统计学方法 采用SPSS17.0统计软件进行数据分析。计量资料用均数±标准差(x±s)表示。多个样本均数的比较采用单向方差分析(one-way ANOVA)。方差齐性检验如方差齐时多重比较采用LSD方法检验；如方差不齐时方差分析采用近似F检验Welch法,多重比较采用Dunnett’s T3方法检验。检验水准为α=0.05。结果1APS最佳浓度和诱导时间的确定 RT-PCR结果显示；①与HepG2和L-02细胞相比,不同浓度APS诱导的HepG2(F=99.994, P=0.000)和L-02(F=148.305, P=0.000)细胞中Hepcidin表达均显著上调,均以150mg/L的APS诱导效果最佳(P=0.000)；②与HepG2细胞相比,150mg/LAPS诱导的不同时间点的HepG2细胞中Hepcidin表达均显著上调(F=57.813,P=0.000),以48h诱导效果最佳(P=0.000)；③与L-02细胞相比,150mg/LAPS诱导的不同时间点的L-02细胞中Hepcidin表达均显著上调(F=172.009,P=0.000),以72h诱导效果最佳(P=0.000)。 点击此处 鉴于以上研究结果,后续实验中,对于人肝癌HepG2细胞,APS诱导浓度和时间采用：150mg/L,48h。对于人肝细胞L-02,APS诱导浓度和时间采用：150mg/L,72h。2APS对人肝癌HepG2细胞和人肝细胞L-02中Hepcidin表达的影响 Western blotting结果显示： APS可明显诱导HepG2(t=15.176,

P=0.000)和L-02细胞中Hepcidin表达上调(t=8.880, P=0.000)。与对照组相比,HepG2细胞中Hepcidin表达上调3.64倍,L-02细胞中Hepcidin表达上调3.59倍。3C57BL/6小鼠高铁负荷模型的制备 多功能全自动生化分析仪检测小鼠血清铁和空气-乙炔原子吸收法方法检测小鼠肝、脾、心脏铁含量的结果显示：与生理盐水组相比,模型+生理盐水组小鼠血清铁(t=22.851,P=0.000)、肝脏(t=67.361,P=0.000)、脾脏(t=32.078,P=0.000)和心脏(t=30.174,P=0.000)铁均显著增高。小鼠血清铁增高2.91倍、肝脏铁增高10.51倍、脾脏铁增高13.98倍、心脏铁增高5.41倍,小鼠高铁模型制备成功。4APS对C57BL/6小鼠肝细胞中Hepcidin表达的影响 Western blotting结果显示；与生理盐水组相比,APS组、模型+生理盐水组和模型+APS组小鼠肝细胞中Hepcidin表达均显著上调(F=102.557,P=0.000)。与生理盐水组相比,APS组小鼠肝细胞中Hepcidin表达上调2.24倍,模型+生理盐水组小鼠肝细胞中Hepcidin表达上调2.22倍,模型+APS组小鼠肝细胞中Hepcidin表达上调3.36倍,其中,以模型+APS组C57BL/6小鼠肝细胞中Hepcidin表达上调最明显(P=0.000)。

5APS对C57BL/6小鼠血清铁的影响 多功能全自动生化分析仪检测小鼠血清铁变化的结果显示；与生理盐水组相比,APS组小鼠血清铁显著降低(P=0.000),而模型+生理盐水组、模型+APS组小鼠血清铁显著增高(P=0.000)。与模型+生理盐水组相比,模型+APS组小鼠血清铁显著降低(P=0.000),降低了32.96%,但仍高于生理盐水组和APS组(P=0.000)。6APS对C57BL/6小鼠肝、脾、心脏中铁含量的影响 空气-乙炔原子吸收法方法检测小鼠肝、脾和心脏铁变化的结果显示：与生理盐水组相比,APS组小鼠肝脏、脾脏和心脏铁都显著降低(P=0.000),而模型+生理盐水组和模型+APS组小鼠肝脏、脾脏和心脏铁都显著增高(P=0.000)。与模型+生理盐水组相比,模型+APS组小鼠肝脏、脾脏和心脏铁显著降(P=0.000),分别降低了56.67%、51.13%和44.30%,但仍高于生理盐水组和APS组(P=0.000)。7APS对人肝癌HepG2细胞中P38表达和磷酸化的影响 更多 Western blotting结果显示：HepG2细胞、SB+APS+HepG2细胞和APS+HepG2细胞中P38的表达无显著变化(F=0.435,P=0.666)。与HepG2细胞相比,APS+HepG2细胞中P38磷酸化显著增加(P=0.000),而SB+APS+HepG2细胞中P38磷酸化显著低于APS+HepG2细胞(P=0.000),抑制率为77.07%。8APS对人肝细胞L-02中p38和磷酸化p38表达的影响 Western blotting结果显示；L-02细胞、SB+APS+L-02细胞和APS+L-02细胞中P38的表达无显著变化(F=0.691,P=0.537)。与L-02细胞相比,APS+L-02细胞中P38磷酸化均显著增加(P=0.000),但SB+APS+L-02细胞中P38磷酸化显著低于APS+L-02细胞(P=0.000),抑制率为56.77%。 9APS对C57BL/6小鼠肝细胞中P38表达和磷酸化的影响 Western blotting结果显示；与生理盐水组相比,APS组、模型+生理盐水组和模型+APS组小鼠肝细胞中P38的表达无明显差异(F=2.669,P=0.