01）；KM＋LA组小鼠ABR阈移虽然在用药后也有增大，但较KM组明显减小（P＜0.01）。
2．对照组耳蜗外毛细胞、螺旋神经节及血管纹中均可见p-p38MAPK和p-JNK表达，其阳性免疫反应产物呈棕黄色，分布于胞浆及胞核内。KM组、KM＋LA组和LA组小鼠耳蜗中p-p38MAPK和p-JNK阳性反应产物的分布与对照组大致相同，但KM组的阳性染色比对照组明显加深；而KM＋LA组的阳性染色则较KM组明显减弱。显微图像分析结果显示，KM组小鼠耳蜗p-p38MAPK和p-JNK表达较对照组明显增强（P＜0.01）；而KM＋LA组小鼠耳蜗p-p38MAPK和p-JNK的表达则明显弱于KM组（P＜0.01）。 3．蛋白质印迹检测结果显示，对照组小鼠耳蜗p-p38MAPK和p-JNK的电泳条带较弱，而KM组小鼠耳蜗p-p38MAPK和p-JNK的电泳条带均明显强于对照组，KM＋LA组小鼠耳蜗p-p38MAPK和p-JNK的电泳条带则较KM组明显减弱。半定量分析结果显示，KM组小鼠耳蜗p-p38MAPK和p-JNK的蛋白表达水平均较对照组明显增高（P＜0.01）；而KM＋LA组小鼠耳蜗p-p38MAPK/β-actin比值和p-JNK/β-actin比值则均较KM组明显减小，即p-p38MAPK和p-JNK的蛋白表达水平表达较KM组明显降低。 也许 结论 p38MAPK和JNK介导了KM对BALB/c小鼠的耳毒性损伤，LA可通过显著抑制KM所致p-p38MAPK和p-JNK的高表达，从而有效防护KM的耳毒性，这可能是LA发挥防护作用的机制之一。
减数分裂是遗传学的基础,它保证了有性生殖生物个体世代之间染色体数目的稳定性,为有性生殖过程中创造变异提供了遗传的物质基础。小鼠卵母细胞的减数分裂是极端的不对称分裂,分裂过程中排出非常小的不具有生物学功能的极体和含有大部分母源物质的卵细胞,为后期的受精和早期胚胎发育做准备。 丝氨酸/苏氨酸相似激酶(ste-20like kinase)是在进化上是非常保守的微管相关蛋白,并且是Rho-GTPase Cdc42/Rac主要的下游靶蛋白,参与许多重要细胞活动,例如细胞迁移,细胞骨架重组以及诱导细胞凋亡和影响细胞周期进程等,是细胞有丝分裂所必需的。 首先,本文针对SLK在小鼠卵母细胞减数分裂过程中四个典型时期GV期,GVBD期,MI期,MII期,即培养小鼠卵母细胞Oh,2h,8h和16h的RNA水平表达量进行研究,通过RT-PCR的方法检测。验证了SLK在各个时期的RNA水平表达量很高,并且随着减数分裂进程的推进,逐渐增加。
这个 其次,主要针对SLK在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的表达和定位进行了研究。检测了小鼠卵母细胞体外培养的Oh,2h,8h和16h,即相应的小鼠卵母细胞成熟的GV期,GVBD期,MI期,MII期SLK的表达和定位情况。证实了SLK在小鼠卵母细胞减数分裂过程中各时期表达均衡全过程。通过免疫荧光染色方法,发现SLK特异性地定位于减数分裂各期的染色体着丝粒上。 同时,通过NOCO对卵母细胞进行处理后,利用染色体扩展方法对SLK在卵母细胞染色体上的定位与表达进行了研究。实验显示在小鼠卵母细胞减数分裂过程MI和MII时期,经过NOCO处理,SLK的定位和表达明显强于对照组,实验结果说明经过NOCO处理将微管蛋白和染体色着丝粒之间的连接破坏之后,SLK的表达明显增强。该结果显示SLK与微管相关。对于纺锤体与染色体连接是非常重要的。
然后,主要针对SLK与Crest在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的定位关系进行了研究。本文中采用染色体扩展的试验方法对二者进行了研究。实验显示,SLK在小鼠卵母细胞减数分裂全程都有定位,在Pro-MI,MI和MII主要定位在染色体着丝粒上,并且SLK与Crest共染实验显示二者共定位于染色体着丝粒上。实验结果说明SLK与检验点蛋白相关,为了研究SLK与检验点蛋白有着怎样的关系,我们设计了下一个实验进行进一步研究。 为了验证SLK与检验点蛋白的相互关系,本文对SLK与Mad1在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的定位关关系进行了研究。使用染色体扩展的试验方法对二者的定位进行了研究,实验结果显示SLK和Mad1在小鼠卵母细胞Pro-MI期共定位于染色体的着丝粒上。但是,在卵母细胞分裂中期(MI),MAD1离开着丝粒,同时SLK依然存在于着丝粒上。当NOCO处理以后Mad1在分裂后期又回到着丝粒上与SLK相重合。实验结果说明SLK与检验点蛋白Mad1有着密切的关系。 最后,为了研究SLK在小鼠卵母细胞中的功能,利用显微注射方法对小鼠卵母细胞注射Si-RNA和Morphlinor,对SLK进行敲降,来观察研究SLK对于减数分裂进程的影响,实验结果显示,SLK对小鼠卵母细胞减数分裂进程时间以及成熟率影响不显著。 购买BVD-523 通过以上研究表明,SLK对于小鼠卵母细胞减数分裂过程是十分重要的。因此对于SLK的研究同时也是十分必要的。本文中就针对SLK小鼠卵母细胞减数分裂进程中进行了详细的研究。
目的：建立哮喘小鼠模型并观察小鼠气道炎症及气道黏液分泌的情况。 方法：清洁级BALB/c雄性小鼠20只随机分为两组：生理盐水对照组(NS组)和哮喘组(AS组),各10只。AS组于第1、13天腹腔注射卵清白蛋白(OVA)致敏,第19天开始雾化吸入5%OVA溶液30min,连续激发5天,制备哮喘小鼠模型,NS组以生理盐水代替OVA,处理方法同AS组。测定各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数和白细胞分类计数,以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中IL-5和IL-32水平,阿尔辛蓝—过碘酸雪夫(AB-PAS)染色观察气道杯状细胞及气道分泌黏液,HE染色和VG染色观察肺组织病理学改变,RT-PCR、免疫组织化学(IHC)及免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中黏蛋白Muc5ac mRNA及蛋白水平的表达。 结果：AS组小鼠BALF中的细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞及中性粒细胞计数、IL-5和IL-32水平、肺组织AB-PAS阳染面积、Muc5ac mRNA和蛋白表达均高于NS组,差异均有统计学意义(均P0.05)；地塞米松和U0126可以抑制ERK1/2的磷酸化,且二者差异无统计学意义；各组小鼠Muc5ac mRNA和蛋白表达与ERK1/2的磷酸化水平呈高度正相关(r值分别为0.983、0.