05)。划痕试验显示其侵袭性也明显增高。CAF培养基培养的KYSE-150细胞对各个浓度的顺铂及紫杉醇的抗性较KYSE-150明显增强，克隆形成试验显示其放疗抗性亦明显增强，差异有统计学意义(P
目的：构建小鼠环孢素肾病(CCN)模型,通过特异性抑制TGF-β1,观察Smad2/3、
ILK信号蛋白变化,评估TGF-β1/Smad/ILK信号通路在CCN小管间质纤维化中的作用。 方法：BALB/c小鼠50只随机分成5组(10只/组)：环孢素模型组(CMG)、干预模型组(IMG)、溶媒对照组(SCG)、低盐对照组(LCG)和正常对照组(NCG)。CMG与IMG组采用低盐饲养并环孢素60mg/(kg.d)灌胃,从第28天腹腔给予TGF-β1特异抑制剂SB-43154210mg/(kg.2d)。38天后处死小鼠,取血清测定血肌酐(SCr)；取肾脏组织常规染色观察病理变化,碱水解法检测Hyp水平,免疫组化观察TGF-β1、磷酸化Smad2/3(P-Smad2/3)、ILK着染情况,RT-PCR检测TGF-β1、Smad2/3及ILK mRNA表达,Western Blot检测ILK蛋白表达。 结果：①两个环孢素模型组(CMG和IMG)小鼠体重显著下降(P<0.01)、SCr显著升高(P<0.05)。②肾脏病理显示三个对照组(NCG、LCG和SCG)小鼠肾脏结构无明显异常,但两个环孢素模型组小鼠肾小管结构不同程度损伤,间质炎性细胞增多,蓝色胶原染色不同程度增多,CMG组小鼠肾脏病变尤其明显。③三个对照组肾脏Hyp水平无明显差异,但两个环孢素模型组肾组织Hyp水平明显增多(P<0.01),IMG组Hyp低于CMG组(P<0.01),突出表达于小管间质,IMG组上述因子免疫着染程度低于CMG组(尸<0.01),ILK表达上调低于CMG组(P<0.01),但IMG组ILK表达上调低于CMG组(P
目的 通常 或者 牙周炎的致病因素复杂,并受全身防御机制的调控和各种局部因素的影响。牙合创伤作为牙周炎的局部促进因素可加重牙周病的进展,因此,明确应力在牙周组织适应性改建中的作用机制对于牙周炎病因病理机制的研究具有重要意义。目前研究认为,TGF-β1,不仅参与了牙周组织的发育、牙齿移动、牙周炎症、免疫调节及牙周组织再生等一系列生理病理过程,还对牙周膜间隙的维持、牙周膜细胞的分化和增殖,细胞外基质的合成及降解等起重要的调控作用。然而,这种细胞因子在应力介导的HPDLF增殖中的生物学变化规律及其调节机制尚未得出明确结论。本研究拟在成功构建牙周膜成纤维细胞体外培养-力学刺激模型的基础上,研究周期性张应力对HPDLF增殖的作用,探讨TGF-β1的表达与HPDLF增殖之间的关系,明确周期性张应力介导的TGF-β1对HPDLF
I型胶原mRNA表达的影响。本课题有望揭示周期性张应力介导的牙周膜适应性改建的分子机制,为深入研究咬合创伤的致病机理与牙周炎的关系提供理论依据,为咬合创伤及牙周炎基因治疗关键靶点的筛选提供实验基础。 方法 本实验以体外培养的人牙周膜成纤维细胞为研究对象,利用多通道细胞牵张应力加载系统,构建人牙周膜成纤维细胞体外培养-力学刺激模型。实验组分为施加周期性张应力(加力幅度为10%,频率为0.1Hz)2h组、6h组、12h组、24h组,以不加力组(0h)为对照组,观察各组细胞形态变化；利用CCK-8检测细胞增殖活性；利用ELISA检测各组TGF-β1的表达；并应用TGF-β1特异性抑制剂SB431542,利用RT-PCR检测技术检测周期性张应力作用下TGF-β1对工型胶原基因表达的影响。采用SPSS17.0统计分析软件对检测结果进行分析,P<0.05),组间比较通过LSD统计方法差异有统计学意义(P0.05),6h表达活性增强,12h达到本次实验的峰值(P<0.05),24h表达活性明显降低(P<0.05),其变化趋势同加力后细胞增殖的变化；加入抑制剂的对照组和12h组分别与不加抑制剂的该两组相比,CCK-8检测细胞增殖受到抑制,差异均有统计学意义(P
目的复制20mJ·cm-2UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型、iNOS瞬时转染HaCaT细胞模型,从诱导型一氧化氮合酶(iNOS)/一氧化氮(NO)角度、转化生长因子β(TGF-β)/信号转导分子(Smads),研究扇贝多肽(Polypeptide
www.selleckchem.cn/products/GDC-0941.html from Chlamys farreri, PCF)抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法复制20mJ·cm-2UVB诱导HaCaT细胞凋亡模型。利用阳离子脂质体(LipefectimeTM2000)法建立iNOS瞬时转染HaCaT细胞模型。实验设计分组：对照组、UVB模型组、UVB+TGF-β受体抑制剂SB431542组、UVB+iNOS特异性抑制剂SMT组、UVB+NO清除剂Carboxy-PTIO组、UVB+1.42～5.69mmol·L-1PCF组、iNOS瞬时转染组。Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡率：Real-Time PCR检测TGF-β、Smad2、Smad3、 Smad4、Smad7mRNA的经时(0、3、6、10、12、15、18、24h)表达；蛋白质印迹法检测TGF-β、p-Smad2/Smad3、iNOS在UVB辐射损伤HaCaT细胞后细胞内的经时(0、3、6、10、12、15、18、24h)变化。结果Hoechst33258荧光染色检测UVB损伤HaCaT细胞后18h的凋亡率约为40%；mRNA的经时表达显示UVB辐射后Smad2和Smad3表达量与辐射前相比差异无统计学意义(P>0.05),Smad4mRNA表达于12h开始升高,而Smad7mRNA表达于Oh升高后下降,12h达高峰；蛋白经时变化显示TGF-β于20mJ·cm-2UVB照射后孵育3h可检测到表达量达峰后下降(P＜0.01),18h达第二次高峰,而p-Smad2/Smad3在UVB照射后孵育3h开始升高,12h,15h蛋白表达量达高峰(P＜0.01)；iNOS蛋白表达6h开始升高,18h,24h达高峰；iNOS瞬时转染模型中,TGF-β蛋白表达与非转染组相比显著升高(P<0.