05%透明质酸酶和0.2%Ⅱ型胶原酶)获得分散的大鼠肋生长板软骨细胞(rat costochondral growth PLX4032细胞系 plate chondrocyte,RGC),常规接种,单层培养。对原代～第5代RGC进行生长动力学分析,并通过免疫细胞化学、阿尔新兰染色和Western blot检测原代～第5代RGC中Ⅱ型胶原、α-SMA和蛋白多糖的分布和表达。 结果:原代培养的生长板软骨细胞中95%以上的细胞Ⅱ型胶原阳性染色,细胞核周围和细胞膜周边都有Ⅱ型胶原的阳性染色,阳性染色的纤维包裹着细胞核,保持圆形的细胞强阳性染色。随着传代次数的增加,表达Ⅱ型胶原的细胞比例和表达量下降,第6代RGC中仅保持圆形的细胞仍呈阳性染色。原代培养的RGC表达大量的蛋白多糖,阿尔新兰阳性染色。第2,3代阿尔新兰染色减少,3代后阿尔新兰染色皆呈阴性。原代RGC中,α-SMA的表达很弱,随传代次数增加,α-SMA的表达量逐渐增高;Ⅱ型胶原的表达刚好和α-SMA相反,原代RGC表达最强,随着传代次数的增加,表达逐渐下降。

结论:成功建立大鼠肋生长板软骨细胞的体外培养模型。单层培养的RGC在第4代后逐渐失去分化表型,α-SMA可以作为RGC去分化的一个新的标志物。
血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)是机体一类重要的细胞群体,在血管通透性屏障、免疫防御及炎症反应中起着极其重要的作用[1,2]。能够合成并分泌多种活性因子,其中IL-6、ICAM-1 较有代表性,而IL-6 则被认为是内皮炎症反应的最佳标志分子[2]。越来越多的研究表明,内皮细胞作为LPS 作用的靶细胞,在LPS 引起的脓毒症、脓毒性休克、多器官功能衰竭等病理过程中起着关键的作用,目前认为血管内皮功能障碍及凋亡不仅是心脑血管疾病发生的共同环节,而且是败血症、休克、创伤等应激情况下发生MODS

更多 和ARDS 的重要原因。在ARDS 发生过程中,血管内皮细胞既是靶细胞也是效应细胞,它的损伤与激活是机体发生失控性炎症反应及高通透性肺水肿的根本环节[1]。糖皮质激素(glucocorticoid,GC)对ARDS 的抗炎作用必然会以血管内皮细胞作为一个主要靶点,但长期以来有关糖皮质激素治疗ARDS 的研究多以临床观察为主,而一些涉及到血管内皮的基础研究则主要探讨白细胞与血管内皮的粘附及对内皮的损伤,而涉及到糖皮质激素作用机制的研究则主要在受体水平进行。有关糖皮质激素治疗ARDS 时对血管内皮保护的机制,特别是受体前调节机制的研究目前尚未见报道。 本实验以内毒素脂多糖LPS(lipopolysaccharide,LPS)致伤体外培养的人脐静脉内皮细胞(human Sotrastaurin半抑制浓度 umbilical vein endothelial cell,HUVEC) , 然后观察糖皮质激素(Dexamethasone,Dex)对HUVEC 受伤前后不同时点表达IL-6、ICAM-1 等细胞因子的影响,及HUVEC 发生凋亡的情况,以确定其对血管内皮的炎性损伤是否具有保护作用。然后用RT-PCR

等方法观察人脐静脉内皮细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)、盐皮质激素受体(mineralocorticoid receptor,MR)及糖皮质激素受体前调节的关键酶11β-羟基类固醇脱氢酶(11-βhydroxysteroid dehydrogenase, 11β-HSD)基因的表达变化,并观察11β-HSD 的经典抑制剂甘草次酸(glycyrrhizic acid,GA)在其中的作用。力图阐明糖皮质激素保护血管内皮炎性损伤的受体前调节机制,探讨其在ARDS 治疗中的意义。 主要研究结果和结论如下: 一、不同浓度LPS 刺激人脐静脉内皮细胞,在刺激3h 开始时即可使HUVEC
背景和目的:病态窦房结综合征是临床常见疾病,对人类健康危害很大,有关其发病机制及防治措施的研究一直是心血管病研究领域的重要内容之一。本实验室在前期的研究中发现,缺血/再灌注(I/R)可引起在体及离体窦房结细胞结构和功能的改变,影响其电信号发放的节律和频率,导致电生理活动的紊乱。而心肌缺血预适应(IP)是迄今发现的最强大的机体内源性保护机制,普遍存在于正常动物及人的不同组织和器官,能有效对抗缺血及再灌注损伤所造成的多种心肌损害。但IP 的信号转导途径非常复杂,IP 的保护机制至今尚未阐明,有关IP 对窦房结的影响研究也十分有限。近期研究显示,KATP通道开放在IP 中具有重要作用,但不同类型KATP通道开放后的相关效应及其对IP 信号转导的影响仍存在诸多争议。细胞骨架也因其对信号转导的重要调节作用而逐渐被IP 研究所关注。研究表明,细胞骨架不仅调节着心肌细胞的电、机械活动,而且骨架结构的完整性对IP 效应的产生也具有重要影响。本研究将利用离体培养的乳鼠窦房结细胞,观察模拟IP 对细胞活性、离子稳态、骨架结构及离子通道的影响,探讨模拟IP 对乳鼠窦房结细胞的保护作用及机制;观察线粒体KATP通道在IP 中的作用,探讨KATP通道开放在IP 信号转导中的作用环节;观察细胞骨架结构改变对IP 效应的影响,探讨维持骨架结构完整性在IP 中的作用意义。为防治窦房结I/R 损伤提供理论依据和实验证据。 方法: 1.以Ⅱ型胶原酶为主消化分离乳鼠窦房结细胞,配合差速贴壁及Brdu 纯化培养。 2.