The viability and apoptosis of the cells were assessed by using MTT and flow cytometry. The expressions

of m RNA and protein were detected by using real-time PCR and western blot analysis. 点击此处 Results The exposure of RINm5 F cells to IFN-γ for 48 h led to increased apoptosis percentage of the cells. Visfatin pretreatment significantly increased the cell viability and reduced the cell apoptosis induced by IFN-γ. IFN-γ-induced increase in expression of p53 m RNA and cytochrome c protein, decrease in m RNA and protein levels of anti-apoptotic protein Bcl-2 were attenuated by visfatin pretreatment. Visfatin also increased AMPK and ERK1/2 phosphorylation and the anti-apoptotic action of visfatin was attenuated by the AMPK and ERK1/2 inhibitor. Conclusion These results suggested that visfatin protected pancreatic islet cells against IFN-γ-induced apoptosis via mitochondria-dependent

apoptotic pathway. The anti-apoptotic action of visfatin is mediated by activation of AMPK and ERK1/2 signaling molecules.
近年来,我国遭遇的灾难给人们带来巨大财产损失的同时,也带来严重的后遗症——创伤后应激障碍(post trauma stress disorder,PTSD)。国内外学者研究发现,PTSD患者有海马萎缩、海马功能活动下降以及N-乙酰天冬氨酸的减少。且中
骨重建是骨骼的自我更新过程,包括破骨细胞介导的骨吸收和成骨细胞介导的骨形成,两者失衡时可导致骨质疏松,因此研究骨重建过程对了解骨质疏松病变十分重要。1973年Berg和Carlson等首次发现腺嘌呤核糖核苷酸(adorosine monophosphate,AMP)活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK),AMPK是蛋白激酶链中的关键激酶,可感应细胞能量代谢状态变化并经多种途径调节细胞能量平衡[1],被称为真核细胞的”燃油量表”或”能量感受器”。AMPK可通过磷酸化多种代谢酶和调控基因转录与表达直接或间接影响骨代
丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated selleck Inhibitor Library protein Kinases,MAPK)参与多种细胞功能的调控,尤其在细胞增殖、分化及凋亡过程中,是多种信号转导途径的共同作用部位。目前已发现存在着多条并行的MAPK信号转导通路,最重要的有细胞外信号调控蛋白激酶(extracellular regulatedkinase,ERK)、端激酶/应激激活的蛋白激酶(c-jun N-terminal
随着生活环境和生活方式的变化,我国恶性肿瘤的发病率不断升高,已成为排名第一位的致死疾病,严重地威胁着人民的生命和健康。因此,寻找有效的抗癌药物已成为医药研发的热点。临床上紫杉醇对各种恶性肿瘤均有显著疗效,但其诱发的神经病理性疼痛仍困扰着医学界。神经病理性疼痛是由躯体感觉神经系统的损伤或疾病而直接造成的疼
目的:探讨一贯煎对大鼠肝纤维化的拮抗作用。方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组、一贯煎组。除正常组外,其余3组均建立四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化模型。造模后,一贯煎组和秋水仙碱组予相应药物灌胃、正常组和模型组以0.9%氯化钠溶液灌胃,灌胃次数为1次/d。灌胃4周后,检测大鼠肝组织基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1),通过病理染色评价肝纤维化程度。结果:与正常组相比,模型组肝纤维化程度增加,MMP-1降低、TIMP-1升高、MMP-1/TIMP降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,一贯煎组及秋水仙碱组肝纤维化程度减轻,TIMP-1降低(P
目的通过卸负荷及药物干预相结合建立大鼠胸骨上小切口缩窄及松解模型,探讨芒果苷对大鼠压力超负荷后卸负荷的心室肥厚转归的影响。方法选用5周龄、体质量150~180

一般 g雄性SD大鼠48只,行非人工通气下胸骨上小切口升主动脉缩窄术致大鼠左心室肥厚,利用单一去缩窄以及去缩窄联合应用芒果苷干预方法,将所有存活动物随机分为假手术组、超负荷组(升主动脉缩窄6周)、卸负荷组(升主动脉缩窄术后6周后松解4周)以及芒果苷组[缩窄术后6周后松解,松解术后以芒果苷干预4周,20 mg/(kg·d).i.g],通过心肌大体标本、动物超声心动图,病理学染色比较大鼠在此过程中的心脏形态、质量,左室壁厚度及心肌病理学改变。结果与假手术组相比,超负荷组心肌左室后壁收缩期厚度(4.25±0.43)mm、舒张期厚度(2.89±0.42)mm及室间隔收缩期厚度(3.92±0.71)mm、舒张期厚度(2.59±0.49)mm显著增厚(P<0.01),心脏体积进一步减小,心肌细胞体积缩小且排列规则,间质纤维化程度有一定改善。结论芒果苷联合卸负荷可显著改善超负荷大鼠心室肥厚。
ATP是维持机体细胞正常代谢所必须的能量载体,也是一种重要的神经递质。”嘌呤受体”是指ATP及其代谢产物ADP、AMP和腺苷所结合的受体。Burnstock等(1978年)将嘌呤受体分为P1和P2受体两类,P1受体又称腺苷受体;P2受体分为P2X(离子通道受体)和P2Y(G蛋白偶联受体)受体。由于分子克隆技术的迅速发展,迄今已从人体组织细胞
为了获得高纯度、高品质的丹参酮,使其更好地发挥药理活性,在查阅国内外近10年有关丹参酮研究文献的基础上,对其提取纯化、合成制备、药理作用等研究成果进行系统综述.结果显示,应用现代技术手段提取纯化得到的丹参酮纯度较高、品质较好,且易于操作,条件容易控制,其中非离子表面活性剂辅助提取、超临界CO2萃取、超声提取、超高压辅助提取等是应用前景较广的经济、有效、绿色的提取方法.

05),而OA-FLS与关节创伤-FLS之间的PTEN蛋白表达水平无统计学差异。(3)RA-FLS中的Akt蛋白Thr308位点磷酸化水平显著高于OA-FLS及关节创伤-FLS(P<0.01),且OA-FLS中该位点的磷酸化水平显著低于关节创伤-FLS(P
真核延长因子Ⅱ激酶(eE F2K)是一个在钙调蛋白通路中结构和功能上比较独特的蛋白激酶。eE F2K可以在蛋白质合成、细胞周期及在肿瘤细胞中诱导自噬和凋亡,且在蛋白质延伸过程中起一个关键作用。其下游基因真核延长因子Ⅱ(eE

F2)属于GTP家族成员是蛋白质合成所必需的,eE F2K磷酸化eE F2,从而抑制eE F2的活性阻止蛋白质的正常合成。近年来,在脑胶质瘤、乳腺癌等多种肿瘤中报道eE F2K表达上调,促进肿瘤的发生、发展。因此,进一步探讨eE F2K在肿瘤细胞中的潜在分子机制,将有望成为肿瘤治疗中新的生物指标和药物靶点。
胃癌的发生发展涉及多个分子信号通路和许多细胞因子,其中比较重要的包括PI3K/AKT、MAPK通路,HER、VEGF/VEGFR、MET等生长因子及受体家族,COX-2、NF-κB、STAT、白介素家族等炎症相关因子,他们参与了胃癌细胞凋亡抑制、增殖促进、周期调控以及胃癌侵袭迁移、血管生成等过程。这些因子在胃癌中特异性表达,可以作为肿瘤标记物用于胃癌的靶向治疗,相应药物多已进入临床试验阶段。在上述理论基础上,胃癌靶向诊断也有了新的进展,闪烁扫描法、内镜等手段逐渐趋于成熟,但特异性探针的研究多处于临床前期阶段,仍有待进一步的发展。
内分泌治疗是雌激素受体阳性乳腺癌的重要系统治疗手段,但原发性与继发性耐药是当前内分泌治疗面临的难题。耐药机制主要包括:ER表达缺失或表观遗传修饰;共调因子表达失衡;雌激素受体通路与生长因子受体(growth Selleck DNA Methyltransferase inhibitor factor receptor,GFR)通路的交叉效应;特异性miRNA表达改变;乳腺癌上皮间质转化(EMT)等。根据Pub Med检索获取相关资料,就近年来雌激素受体阳性乳腺癌内分泌耐药机制及治疗策略研究进展进行综述。
内分泌治疗是激素受体阳性乳腺癌最有效的治疗方式,然而其有效性通常受到耐药的制约,这在进展期乳腺癌患者中几乎是不可避免的。最近,有许多研究对这些耐药模式的分子机制进行了探索,但仍未阐明其确切的机制,不过许多研究都将雌激素受体和生长因子受体信号通路之间的相互作用视为雌激素依赖性乳腺癌内分泌耐药的关键点。一些研究还探讨了介导内分泌耐药的不同分子途径,并对一些治疗靶点进行了评估。尽管大多数信号通路靶向制剂都还处于Ⅰ期或小范围Ⅱ期临床试验阶段,但一些研究已取得令人鼓舞的结果。本文旨在对乳腺癌内分泌治疗耐药的新进展进行综述。
近来研究证实肺腺癌具有与致癌作用及靶向药物疗效有关的独特分子特征,这些分子改变被视为驱动基因,负责恶性病变的发生和维持。目前发现约50%肺腺癌携带驱动基因,其中EGFR通路起重要作用。本文将对肺腺癌驱动基因的意义及相关研究进行综述。
肝细胞癌(hepatocellular

或者 NVP-AUY922研究购买 carcinoma,HCC)是我国原发性肝癌中最常见的一种类型,也是全球癌性死亡中最重要的一个因素。目前治疗方法有多种,包括药物对症治疗、手术治疗、放射治疗、生物免疫治疗等。随着相关信号转导机制研究的发展,靶向疗法逐渐引起专家学者的重视。本文总结了涉及HCC主要相关信号传导通路及对应靶向治疗药物作用机制及研究进展,并述及其局限性,以期促进其临床应用。
肿瘤相关分子标记物的发现,导致靶向治疗药物迅速发展。我们对近期在非小细胞肺癌中发现的可能影响靶向治疗的相关分子标记物,即所谓的驱动突变基因进行综合分析。期待依据肿瘤个体基因情况而决定的靶向治疗,可使患者在一定程度上获得更大治疗收益。
子宫内膜癌是女性生殖系统中最常见的一种恶性肿瘤,其发生和发展与多条信号通路的异常以及肿瘤相关基因的突变有关。磷脂肌醇3-激酶(phosphoinositide-3kinase,PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)信号通路与Janus激酶(janus kinase,JAK)/信号转导及转录激活因子(signal transducer andactivator of transcription,STAT)信号通路是近几年来与子宫内膜癌发生相关信号通路研究的热点;大量的研究发现,它们的调节异常与子宫内膜的发生、发展、预后以及复发密切相关。除了肿瘤相关基因异常外,有研究认为肿瘤的发生不仅是异常细胞以及恶性克隆的产生,还与肿瘤的免疫逃逸(tumor

immune escape)有关,其可使机体不能及时的清除异常组织,从而介导了肿瘤的发生、侵袭与转移。有研究发现,在肿瘤免疫逃逸过程中发挥重要作用的吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)与上述两条通路存在密切的关联,这可能正是肿瘤组织在机体中不仅能够稳定繁殖,还不易被机体免疫系统清除的关键所在。因此,本文旨在就上述两条信号通路与IDO相关性的研究作一综述。
发现中国目前最早的竹子化石记录中国科学院西双版纳热带植物园周浙昆等在云南镇沅哀牢山西坡河谷发现了大量的保存良好的竹子叶片和竹竿化石,标本产自中新统地层(时代为15.97—11.61百万年前)。根据化石的假叶柄形态、叶片宽度、侧脉条数、竿环和箨环的形态等宏观和微观特征,研究人员描述了化石竹亚科2个属(包括1个新属)和4个新种:Bambusium
采用腹腔注射链尿佐菌素的方法建立糖尿病大鼠模型,经海参磷脂型二十碳五烯酸(eicosap-entaenoic acid phosphatidylcholine,EPA-PC)灌胃8周后,检测其对空腹血糖、口服葡萄糖耐量、血清胰岛素和肝糖原含量的影响,探讨其降糖机制.结果表明,海参EPA-PC能显著降低糖尿病大鼠空腹血糖水平(P<0.05),改善口服葡萄糖耐量(P<0.05),促进空腹血清胰岛素的分泌(P<0.01),增加肝糖原含量(P<0.01,P<0.05),抑制GSK-3βmRNA的表达(P<0.

05)；与R组相比,术前30mmin鞘内注射SB216763溶液可在术后2h、6h、24h使大鼠脊髓背角pGSK-3β水平增加,在术后2h、6h使NR2B表达减少,在术后2h、6h、48h使PP1表达增加,差异有统计学意义(P
目的分离培养发育期根端复合体（developing

apical complex DAC)并收集上清，制备不同条件培养基用于培养脂肪干细胞，检测发育期根端复合体细胞上清液对脂肪干细胞(adipose tissue-derived stem cells ADSCs)增殖及分化的影响；研究不同浓度经典Wnt信号激活剂氯化锂（lithium chloride，Licl）对ADSCs增殖分化的影响，探索促进ADSCs增殖分化的最佳Licl浓度。 方法利用组织块结合酶消化法培养出生后20天（postnatal20days PN20d）的SD大鼠下颌磨牙DAC，并运用形态学、组织学及免疫组化染色方法鉴定DAC组织，收集原代DAC细胞的上清通过过滤及不过滤的方法分别制备成不同的条件培养基（DACCM-滤和DACCM-未滤）；MTT检测不同培养条件培养基对ADSCs增殖活性的影响；碱性磷酸酶活性检测及RT-PCR检测不同培养条件基对碱性磷酸酶（alkaline 可能 phosphatase ALP）蛋白活性及基因表达的影响。以不同浓度Licl（0mM、2.5mM、5mM、10mM、20mM、40mM）处理DACCM-未滤培养的ADSCs，MTT检测不同浓度Licl对ADSCs增殖能力的影响；ALP活性检测及RT-PCR检测ALP活性及ALP、BSP基因表达的影响。 结果本实验成功分离培养了发育期根端组织复合体，HE染色指出发育期根端组织复合体取自牙根尚未发育完全的大鼠；细胞形态学观察发育期根端组织复合体细胞为长梭形间充质来源细胞和多角形的上皮来源的细胞混合组成；发育期根端组织复合体细胞免疫组化染色结果CK-14，vimentin阳性表达；发育期根端组织复合体上清分别经过滤和未过滤的方法制备了不同条件培养基；MTT分析结果表明发育期根端复合体细胞条件培养基-未滤（DACCM-未滤）培养的脂肪干细胞增殖活性明显高于普通培养基和发育期根端复合体细胞条件培养基-过滤（DACCM-滤）（P<0.05）；普通培养基培养的脂肪干细胞增殖活性明显高于发育期根端复合体细胞条件培养液（过滤）组（P<0.05）；ALP试剂盒检测ALP活性显示条件培养基（未过滤）培养的脂肪干细胞表达的ALP明显高于普通培养基和DACCM-滤组（P<0.05），40mM浓度Licl明显抑制细胞增殖（P<0.05）；ALP活性检测结果表明5mM浓度Licl促进细胞ALP活性表达，明显高于其他各浓度（P<0.05），40mM浓度明显抑制细胞ALP活性表达（P<0.05），40mM浓度明显抑制细胞ALP、BSP基因表达（P
阿尔茨海默病(AD)是一种慢性神经退行性疾病，主要特征是认知和记忆功能不断恶化，日常生活能力减退，并有各种行为障碍。随着世界人口老龄化加剧，AD的发病率逐年增高。目前临床上主要是通过抑制剂抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性从而增加人体脑内乙酰胆碱(ACh)的水平，改善患者的认知和记忆功能。

DNA Methyltransferase 抑制剂 concentration 本文针对新的乙酰胆碱酯酶抑制剂的开发，设计合成了14个新的2-氨基-4-苯基噻唑类化合物，通过核磁共振氢谱、质谱、红外光谱等对化合物进行了结构鉴定，并且对化合物初次进行体外乙酰胆碱酯酶抑制活性实验，其中8a表现出较好的AChE抑制活性，其IC50=3.54μmol/L。同时又设计合成了18个新的N-酰基-硫色烯并噻唑-2-胺类化合物，通过核磁共振氢谱、质谱、红外光谱等对化合物进行了结构鉴定，并且进行了体外乙酰胆碱酯酶抑制活性试验，21a的AChE抑制活性最好，IC50=7.92μmol/L。8a和21a的活性都优于对照药利斯的明。 为了研究化合物对乙酰胆碱酯酶的作用机制，对活性最好的化合物8a进行了酶促动力学试验，实验结果表明：该化合物是混合型竞争抑制类型，可能同时作用于AChE的两个活性位点。
研究背景： 心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury, MIRI)是现在临床上常见的一种病理生理现象，它是由缺血的心肌在恢复血流后引起的，表现为组织损伤反而更加重，甚至产生不可逆性的损伤。MIRI限制了对缺血心肌的许多重要治疗手段如冠状动脉搭桥术、急性心肌梗死溶栓疗法、经皮腔内冠脉血管成形术等的开展，已成为临床上亟待解决的问题。大量资料表明，细胞凋亡是MIRI后心肌细胞死亡的主要形式。然而，关于MIRI导致心肌细胞凋亡的研究仍大部分集中在凋亡现象的发现及某些尝试性的干预措施，对于凋亡的分子机制尚不十分清楚。随着研究的深入，线粒体在MIRI导致心肌细胞凋亡过程中的调控作用逐渐被揭示，这被认为是凋亡信号转导研究的重大进展之一。近年的研究发现，当细胞接受凋亡刺激信号后，能够引起第二个线粒体来源的胱氨酸酶激活剂/低等电点IAP直接结合蛋白(secondmitochondria-derived

activator of caspase/direct IAP-binding Protein Tyrosine激酶抑制剂 protein with low PI,Smac/Diablo)从线粒体释放入胞浆，发挥促进细胞凋亡的作用。中药附子作为我国传统名方如四逆汤、参附汤的君药，在对MIRI的研究中表现出良好的抗心肌细胞凋亡作用[1-6]。如今，中药单体的研究成为热点，附子多糖(fuzi polysaccharide, FPS)作为从附子中提取出的区别于乌头碱的另一类单体，因其具有降糖调脂、增强免疫力和协助抗肿瘤等药理活性，正逐渐受到人们的关注，然而，关于其对MIRI的心肌保护作用及机制的研究却未见报道。 研究目的： 本研究通过建立新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)损伤模型来模拟体内MIRI，通过给予FPS来观察其对心肌的保护作用，并以细胞凋亡的线粒体信号转导通路作为着眼点，进一步探讨FPS在MIRI中的保护机制，为FPS的药物开发和利用提供坚实的理论基础和实验室依据。 研究方法： 原代体外分离培养SD大鼠乳鼠的心肌细胞，随机分为正常对照（Control）组、缺氧/复氧（H/R）组（缺氧3h后复氧6h）和附子多糖（FPS）组（预先以不同浓度0.

采用Bandleader3.0软件分析目的条带和内参照条带的灰度比值。 4APS对Hepcidin表达的影响 分别提取各组细胞和小鼠肝脏组织总蛋白并定量,通过Western blotting方法检测Hepcidin的表达,通过Bandscan5.0软件分析Western blotting条带灰度与内参照条带灰度比值。 5血清铁及小鼠肝脏、脾脏和心脏中铁含量的检测 DNA Methyltransferase 抑制剂 nmr 制备小鼠血清,送新乡医学院第三附属医院检验科,采用多功能全自动生化分析仪检测血清铁。取新鲜肝、脾、心脏组织,通过空气-乙炔原子吸收法测定小鼠肝、脾和心脏中铁含量。 6黄芪多糖上调Hepcidin的机制 分别提取各组细胞和小鼠肝脏组织总蛋白并定量,通过Western

blotting方法检测P38、p-P38、IL-1、IL-6和TNF-α的表达,通过Bandscan5.0软件分析Western blotting条带灰度与内参照条带灰度比值。 7统计学方法 采用SPSS17.0统计软件进行数据分析。计量资料用均数±标准差(x±s)表示。多个样本均数的比较采用单向方差分析(one-way ANOVA)。方差齐性检验如方差齐时多重比较采用LSD方法检验；如方差不齐时方差分析采用近似F检验Welch法,多重比较采用Dunnett’s T3方法检验。检验水准为α=0.05。结果1APS最佳浓度和诱导时间的确定 RT-PCR结果显示；①与HepG2和L-02细胞相比,不同浓度APS诱导的HepG2(F=99.994, P=0.000)和L-02(F=148.305, P=0.000)细胞中Hepcidin表达均显著上调,均以150mg/L的APS诱导效果最佳(P=0.000)；②与HepG2细胞相比,150mg/LAPS诱导的不同时间点的HepG2细胞中Hepcidin表达均显著上调(F=57.813,P=0.000),以48h诱导效果最佳(P=0.000)；③与L-02细胞相比,150mg/LAPS诱导的不同时间点的L-02细胞中Hepcidin表达均显著上调(F=172.009,P=0.000),以72h诱导效果最佳(P=0.000)。 点击此处 鉴于以上研究结果,后续实验中,对于人肝癌HepG2细胞,APS诱导浓度和时间采用：150mg/L,48h。对于人肝细胞L-02,APS诱导浓度和时间采用：150mg/L,72h。2APS对人肝癌HepG2细胞和人肝细胞L-02中Hepcidin表达的影响 Western blotting结果显示： APS可明显诱导HepG2(t=15.176,

P=0.000)和L-02细胞中Hepcidin表达上调(t=8.880, P=0.000)。与对照组相比,HepG2细胞中Hepcidin表达上调3.64倍,L-02细胞中Hepcidin表达上调3.59倍。3C57BL/6小鼠高铁负荷模型的制备 多功能全自动生化分析仪检测小鼠血清铁和空气-乙炔原子吸收法方法检测小鼠肝、脾、心脏铁含量的结果显示：与生理盐水组相比,模型+生理盐水组小鼠血清铁(t=22.851,P=0.000)、肝脏(t=67.361,P=0.000)、脾脏(t=32.078,P=0.000)和心脏(t=30.174,P=0.000)铁均显著增高。小鼠血清铁增高2.91倍、肝脏铁增高10.51倍、脾脏铁增高13.98倍、心脏铁增高5.41倍,小鼠高铁模型制备成功。4APS对C57BL/6小鼠肝细胞中Hepcidin表达的影响 Western blotting结果显示；与生理盐水组相比,APS组、模型+生理盐水组和模型+APS组小鼠肝细胞中Hepcidin表达均显著上调(F=102.557,P=0.000)。与生理盐水组相比,APS组小鼠肝细胞中Hepcidin表达上调2.24倍,模型+生理盐水组小鼠肝细胞中Hepcidin表达上调2.22倍,模型+APS组小鼠肝细胞中Hepcidin表达上调3.36倍,其中,以模型+APS组C57BL/6小鼠肝细胞中Hepcidin表达上调最明显(P=0.000)。

5APS对C57BL/6小鼠血清铁的影响 多功能全自动生化分析仪检测小鼠血清铁变化的结果显示；与生理盐水组相比,APS组小鼠血清铁显著降低(P=0.000),而模型+生理盐水组、模型+APS组小鼠血清铁显著增高(P=0.000)。与模型+生理盐水组相比,模型+APS组小鼠血清铁显著降低(P=0.000),降低了32.96%,但仍高于生理盐水组和APS组(P=0.000)。6APS对C57BL/6小鼠肝、脾、心脏中铁含量的影响 空气-乙炔原子吸收法方法检测小鼠肝、脾和心脏铁变化的结果显示：与生理盐水组相比,APS组小鼠肝脏、脾脏和心脏铁都显著降低(P=0.000),而模型+生理盐水组和模型+APS组小鼠肝脏、脾脏和心脏铁都显著增高(P=0.000)。与模型+生理盐水组相比,模型+APS组小鼠肝脏、脾脏和心脏铁显著降(P=0.000),分别降低了56.67%、51.13%和44.30%,但仍高于生理盐水组和APS组(P=0.000)。7APS对人肝癌HepG2细胞中P38表达和磷酸化的影响 更多 Western blotting结果显示：HepG2细胞、SB+APS+HepG2细胞和APS+HepG2细胞中P38的表达无显著变化(F=0.435,P=0.666)。与HepG2细胞相比,APS+HepG2细胞中P38磷酸化显著增加(P=0.000),而SB+APS+HepG2细胞中P38磷酸化显著低于APS+HepG2细胞(P=0.000),抑制率为77.07%。8APS对人肝细胞L-02中p38和磷酸化p38表达的影响 Western blotting结果显示；L-02细胞、SB+APS+L-02细胞和APS+L-02细胞中P38的表达无显著变化(F=0.691,P=0.537)。与L-02细胞相比,APS+L-02细胞中P38磷酸化均显著增加(P=0.000),但SB+APS+L-02细胞中P38磷酸化显著低于APS+L-02细胞(P=0.000),抑制率为56.77%。 9APS对C57BL/6小鼠肝细胞中P38表达和磷酸化的影响 Western blotting结果显示；与生理盐水组相比,APS组、模型+生理盐水组和模型+APS组小鼠肝细胞中P38的表达无明显差异(F=2.669,P=0.

收集山东大学齐鲁医院普外科手术切除肝门部胆管癌及癌旁石蜡组织,并制成石蜡组织切片,经免疫组织化学染色检测肝门部胆管癌癌旁组织、无转移的胆管癌组织及有转移的胆管癌组织中的E-cadherin蛋白表达水平,并统计分析其与对应标本中FBXW7表达之间的相关性。8.应用FBXW7稳定低表达和高表达的细胞及其对照组细胞建立裸鼠转移瘤模型,观察肿瘤转移情况；通过HE染色检测肺脏及肝脏组织中转移灶数量,经体内实验验证FBXW7能否抑制胆管癌细胞转移。9.经免疫组织化学染色方法检测各组裸鼠肺脏及肝脏转移灶中FBXW7及E-cadherin表达情况,经体内实验验证FBXW7在胆管癌EMT中的调控作用。[结果]1.成功构建pBabe-shFBXW7.1及pBabe-shFBXW7.2质粒,并稳定转染HuCCTl细胞和RBE细胞(分别命名为HuCCT1-Vector、HuCCT1-shFBXW7.1、 HuCCT1-shFBXW7.2; RBE-Vector、RBE-shFBXW7.1、RBE-shFBXW7.2)。经qRT-PCR和Western

blot险测证实FBXW7低表达稳定转染细胞系构建成功。2.成功构建pBabe-FBXW7质粒,并稳定转染QBC939细胞和FRH0201细胞(分别命名为QBC939-Vector、QBC939-FBXW7; FRH0201-Vector、FRH0201-FBXW7)。经qRT-PCR和Western blot检测证实FBXW7高表达稳定转染细胞系构建成功。3.普通光学显微镜观察显示FBXW7能够抑制胆管癌细胞由上皮细胞形态向间质细胞形态转化。Western blot证实FBXW7能够促进上皮细胞标志分子E-cadherin和α-catenin的表达,同时抑制间质细胞标志分子Fibronectin和Vimentin的表达。4. Western blot证实FBXW7能够抑制干细胞特性标志分子Nanog和OCT4的表达；Primary sphere formation及Secondary Pifithrin-α订单 sphere formation实验证实FBXW7能够抑制胆管癌干细胞自我更新能力。5.经划痕实验、 Transwell小室迁移实验及Matrigel侵袭实验证实FBXW7能够抑制胆管癌细胞体外迁移和侵袭能力。6.统计学分析提示在肝内胆管癌中E-cadherin表达与肿瘤转移呈明显负相关,且其表达量与FBXW7呈正相关。7.统计学分析提示在肝门部胆管癌中E-cadherin表达与肿瘤转移呈明显负相关,且其表达量与FBXW7呈正相关。8.体内实验证实FBXW7可抑制胆管癌细胞转移能力。9.体内实验证实FBXW7可抑制胆管癌EMT。[结论]1.体内外实验证实FBXW7可抑制胆管癌EMT。2.体外实验证实FBXW7可抑制胆管癌细胞干细胞特性。3.体内外实验证实FBXW7能够抑制胆管癌细胞的迁移和侵袭能力。第三部分FBXW7抑制胆管癌上皮-间质转化、干细胞特性及转移的分子机制研究[目的]上述研究经体内外实验已经证实FBXW7能够通过抑制胆管癌EMT及干细胞特性进而抑制其转移。本部分将对FBXW7抑制胆管癌EMT的具体分子机制进行进一步探索。[方法]1.检测FBXW7高表达和低表达的细胞中mTOR及p-mTOR表达量,结合前期文献报道,明确FBXW7在胆管癌细胞中是否能够泛素化降解mTOR。2.应用mTOR特异性抑制剂rapamycin处理FBXW7低表达的细胞,经Western

JNJ-38877605数据表 blot检测EMT标志分子(E-cadherin、Vimentin)表达变化：经Primary

sphere formation及Secondary sphere formation实验检测胆管癌干细胞自我更新能力改变；经划痕实验、Transwell小室迁移实验检测细胞迁移能力变化,细胞侵袭能力变化经Matrigel侵袭实验检测验证。3.应用]mTOR特异性抑制剂rapamycin处理FBXW7低表达的细胞,经qRT-PCR及Western blot检测EMT转录调控因子(Snail、Slug及ZEB1) mRNA水平及蛋白水平改变,进一步分析FBXW7调控胆管癌EMT的分子机制。4.筛选最有意义的EMT转录调控因子,首先检测其在胆管癌细胞中的表达情况；应用胆管癌细胞及FBXW7低表达的胆管癌细胞,shRNA干扰技术沉默所筛选EMT转录调控因子,经Western OSI-744研究购买 blot检测EMT标志分子(E-cadherin、Vimentin)表达变化；同时经划痕实验、Transwell小室迁移实验检测细胞迁移能力变化,细胞侵袭能力变化经Matrigel侵袭实验检测验证。5.收集山东大学齐鲁医院普外科手术切除肝内胆管癌及癌旁石蜡组织,并制成石蜡组织切片,经免疫组织化学染色检测肝内胆管癌癌旁组织、无转移的胆管癌组织及有转移的胆管癌组织中所筛选EMT转录调控因子蛋白表达水平,并统计分析其与对应标本中E-cadherin及FBXW7表达之间的相关性。6.收集山东大学齐鲁医院普外科手术切除肝门部胆管癌及癌旁石蜡组织,并制成石蜡组织切片,经免疫组织化学染色检测肝门部胆管癌癌旁组织、无转移的胆管癌组织及有转移的胆管癌组织中的所筛选EMT转录调控因子蛋白表达水平,并统计分析其与对应标本中E-cadherin及FBXW7表达之间的相关性。7.对FBXW7稳定低表达细胞建立的裸鼠转移瘤模型腹腔注射rapamycin,观察肿瘤转移情况；HE染色检测肺脏及肝脏组织中转移灶数量,并与未用药组比较,经体内实验验证mTOR能否介导FBXW7调控胆管癌转移。8.对FBXW7稳定低表达细胞建立的裸鼠转移瘤模型腹腔注射rapamycin,免疫组织化学染色检测肝脏及肺脏转移灶中FBXW7及E-cadherin表达水平,并与未用药组比较,经体内实验验证mTOR能否介导FBXW7调控胆管癌EMT。[结果]1.经Western blot检测证实胆管癌细胞中FBXW7表达量与mTOR及p-mTOR呈负相关,结合前期报道,证实FBXW7在胆管癌细胞中可泛素化降解mTOR。2.经Western blot检测证实rapamycin可逆转FBXW7沉默引起的上皮细胞标志分子(E-cadherin)表达降低及间质细胞标志分子(Vimentin)表达升高；经Primary sphere formation及Secondary sphere formation实验证实rapamycin能够逆转FBXW7沉默引起的胆管癌干细胞自我更新能力增强；经划痕实验、Transwell小室迁移实验及Matrigel侵袭实验证实rapamycin能够逆转FBXW7沉默引起的胆管癌细胞体外迁移和侵袭能力增强。3.经qRT-PCR及Western blot检测证实rapamycin能够逆转FBXW7沉默引起的EMT转录调控因子Snail、Slug及ZEB1的表达增强。4.

The combined 2D- and 3D-QSAR studies suggest that the moderate-size, hydrophilic and electron-withdrawing group at R1 position, the bulky and hydrophobic group at R2 position, and the minor, hydrophobic, H-bond donor and electron-donating group at R3 position would enhance the anticancer activities. These obtained results help to insight into the action mechanism, and will serve as a basis for the design of new potent anticancer agents.
表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是一类具有独特病理和临床特征的恶性肿瘤。目前由于针对EGFR基因突变阳性NSCLC治疗中TKIs的应用,患者的生存期已超过三年,所以此类患者从诊断到治疗应进行全程管理。首先要进行分子检测,发现EGFR基因突变NSCLC,以避免失去EGFR-TKIs的治疗机会。研究证明,EGFR基因突变NSCLC任何线接受第一代抑制剂治疗,患者疗效及生存获益且耐受性良好。一代EGFR-TKIs耐药后根据失败模式选择后续局部或全身治疗,或根据耐药失败分子机制给予新的分子靶向治疗。对EGFR基因突变NSCLC应实施科学、有序的全程管理。
目的:观察佐剂关节炎大鼠滑膜PTEN/PI3K/AKT通路及缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达,探讨类风湿关节炎血管新生的机制。方法:30只大鼠随机分成正常对照组和模型对照组,模型对照组采用弗氏完全佐剂建立佐剂关节炎大鼠模型。造模成功后第19天,采用酶联免疫吸附法检测大鼠HIF-1α、VEGF、微血管密度(MVD)的表达,采用Western

因为 Blotting检测滑膜PTEN、PI3K、AKT蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数升高,血清MVD、VEGF、HIF-1α表达及滑膜PI3K、AKT升高,PTEN降低。相关性分析显示,PI3K、HIF-1α与MVD呈正相关,VEGF、AKT与足趾肿胀度呈正相关,PTEN与关节炎指数呈负相关。HIF-1α与VEGF呈正相关,PI3K与AKT呈正相关,PTEN与PI3K、AKT、VEGF呈负相关。结论:佐剂关节炎大鼠滑膜PTEN/PI3K/AKT通路表达失调是引起滑膜血管新生的机制之一。
The phosphatidylinositol 3 kinase(PI3K) pathway is frequently altered in cancer, including ovarian cancer(OC). Unfortunately, despite a sound biological rationale and encouraging activity in preclinical models, trials of first-generation inhibitors of mammalian target of Cilengitide订单 rapamycin(m DNA Methyltransferase inhibitor TOR) in OC have demonstrated negative results. The lack of patient selection as well as resistance to selective m TOR complex-1(m TORC1) inhibitors could explain the disappointing results thus far. Nonetheless, a number of novel agents

are being investigated, including dual m TORC1/m TORC2, Akt, and PI3 K inhibitors. Although it is likely that inhibition of the PI3K/Akt/m TOR pathway may have little effect in unselected OC patients, certain histological types, such as clear cell or endometrioid OC with frequent phosphatidylinositol-4,5-biphosphate 3-kinase, catalytic subunit alpha(PIK3CA) and/or phosphatase and tensin homolog(PTEN) alterations, may be particularly suited to this approach. Given the complexity and redundancy of the PI3 K signaling network, PI3 K pathway inhibition may be most useful in combination with either chemotherapy or other targeted therapies, such as MEK inhibitors, anti-angiogenic therapy, and hormonal therapy, in appropriately selected OC patients. Here, we discuss the relevance of the PI3 K pathway in OC and provide an up-to-date review of clinical trials of novel PI3 K inhibitors alone or in combination with cytotoxics and novel therapies in OC. In addition, the challenges of drug resistance and predictive biomarkers are addressed.

In this review,we discuss the role of TGF-β in inflammation and carcinogenesis of the GI tract related to abnormal TGF-β signaling.
目的设计合成1,3,5-三取代吡唑类化合物,并研究其对ALK5所介导的TGFβ信号通路的抑制活性,以期发现新型ALK5抑制剂。方法先以取代的苯甲醛和4-乙酰苯甲腈为原料,合成取代的查儿酮,再与芳基肼或芳基肼盐酸盐反应生成1,3,5-三取代吡唑啉,然后氧化脱氢得到相应的1,3,5-三取代吡唑类化合物,最后对官能团做适当的变换,得到目标化合物;应用基于细胞的TGF-Smad2检测评价了化合物的ALK5抑制活性。结果与结论合成29个未见报道的新目标化合物,其结构均经核磁共振谱与质谱确证,其中化合物6c显示有较好的ALK5抑制活性。

通过研究转化生长因子β(transforming

selleck化学 growth factor-β,TGF-β)的特异性小分子拮抗剂SB-431542对梅花鹿鹿茸软骨层细胞增殖的影响,探讨转化生长因子β在鹿茸快速生长中的调节机制。分离培养生长30天的梅花鹿鹿茸软骨层细胞,将传代培养第2代的细胞经不同浓度的SB-431542(0、1、3、5、8、10μmol/L)作用,培养48h后用MTT法测其细胞增殖的变化,并用SPSS软件分析其差异性。结果显示,SB-431542处理组细胞增殖活性都低于对照组(P<0.01),随着添加SB-431542浓度的升高,对细胞的生长速度抑制更加明显,试验结果表明,TGF-β对维持梅花鹿鹿茸软骨层细胞的快速增殖有重要作用。
青光眼滤过术是目前抗青光眼药物无法控制眼压时青光眼的首选手术方法。但术后结膜下瘢痕形成导致滤过泡通道建立失败一直是困扰青光眼治疗的一个重要因素。目前抗眼表瘢痕形成药物的基础和临床研究虽取得了一定的成果,但寻求一种效率高、安全稳定的抗瘢痕药物仍是一个尚待解决的难题。本文就青光眼术后抗瘢痕形成药物的相关研究作一综述,着重介绍细胞因子相关抗瘢痕药物的研究。
目的研究TGF-β/Smads信号转导通路对急性肺损伤后细胞外基质代谢的影响,以了解该信号转导通路在肺纤维化发生过程中的调控作用。方法用SB431542抑制活化素受体样激酶5(ALK5)来抑制TGF-β/Smads通路。24只雄性SD大鼠,随机分为对照组、烧伤组、早期处理组、后期处理组,每组6只。对照组施行假烫,其他3组大鼠造成30%TBSAⅢ度烧伤。早期处理组分别于烧伤后、1×24 h、2×24 h后腹腔注射SB431542,而后期处理组分别于3×24 h、4×24 h、5×24 h后腹腔注射SB431542,28 d后取肺组织,采用real-ti me PCR法检测MMP-2、MMP-9和TI MP-1 mRNA转录水平;用羟脯氨酸测试盒测定羟脯氨酸含量;并行肺脏病理学检查及评分。统计学处理采用SPSS13.0软件进行单因素方差分析判断组间差异,P
分离培养梅花鹿鹿茸间充质层细胞和前成软骨层细胞,通过研究TGF-β的特异性小分子拮抗剂SB-431542对这两种细胞增殖的影响,探讨TGF-β在鹿茸间充质层细胞和前成软骨层细胞增殖与分化中的调节机制。从生长30天的梅花鹿鹿茸中分离间充质层细胞和前成软骨层细胞,进行体外培养,将传代培养第2代的间充质层细胞和前成软骨层细胞分别在含不同浓度TGF-βⅠ型受体特异性抑制剂SB-431542(0、1、3、5、8、10μmol/L)的培养液中培养,48h后用MTT法测定这两种细胞增殖活性的变化,用SPSS软件对其增殖的差异性进行分析。结果显示,体外培养的鹿茸间充质层细胞呈成纤维细胞样,前成软骨层细胞呈纺锤形或梭形,台盼兰染色显示细胞活性均在90%以上。经SB-431542处理的间充质层细胞的增殖活性低于对照组(P<0.05),而前成软骨层细胞增殖活性高于对照组(P<0.01)。试验表明,TGF-β可能在维持鹿茸间充质层细胞的快速增殖和诱导间充质细胞向软骨细胞分化等过程中起重要的作用。
探讨冷藏是否导致新鲜冰冻血浆(fresh

Casein激酶抑制剂 frozen plasma,FFP)中的转化生长因子-β(transform growth factor-β,TGF-β)发生变化并降低其对内皮细胞迁移的诱导能力及其分子机制.为证实冷藏可能导致FFP中TGF-β的水平升高进而影响其功能,首先采用ELISA法分析当天解冻FFP(FFP 以及 Day 0)和解冻后4℃冷藏1～5天FFP中TGF-β含量,迁移实验及Western blot分析比较FFP(Day 0)和FFP(Day 5)处理人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cells,HPMECs)后的细胞迁移率及TGF-β信号通路Smad2和Smad3磷酸化,进一步采用ALK5-siRNA和ALK5特异性抑制剂阻断细胞TGF-βⅠ型受体ALK5的活性,分析下调TGF-β/Smad2/3信号传导后的内皮细胞迁移率.结果显示:随着冷藏时间的延长,FFP中TGF-β1水平逐渐增加,其增加率为244.31

ng/(L.d)(P
目的探讨转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1/Smad信号传导通路在肾小球系膜细胞(glomerular measanial cell,GMC)中的作用,观察血管紧张素转化酶抑制剂(angiotensin-converting enzyme inhibitor,ACEI)福辛普利(fosinopril,Fos)在该通路中对磷酸化Smad2/3(phosphorylationSmad2/3,P-Smad2/3)和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,ColⅠ)表达的影响,阐明福辛普利的肾保护作用机制。方法采用经典方法进行大鼠肾小球系膜细胞复苏、培养和传代后,将其按处理方式分为3组:TGF-β1组(TGF-β15ng/mL处理);②Fos组(TGF-β15ng/mL+Fos1×10-4mol/L处理);③对照组(空白)。甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法分别检测3组肾小球系膜细胞增殖光密度(optical density,OD)值,计算细胞抑制率;间接免疫荧光法检测磷酸化Smad2/3表达情况;酶联免疫吸附测定(enzyme linkedi mmunosorbent assay,ELISA)法测定Ⅰ型胶原蛋白的变化,计算抑制率。结果各时间点肾小球系膜细胞增殖荧光强度比较,TGF-β1组明显高于对照组,Fos组低于TGF-β1组,差异有显著意义(P<0.

Targeted therapies are novel therapeutics frequently used in cancer patients.During treatment with targeted therapies,viral replication is one of the major problems that can occur.The PubMed database,ASCO,and ASCO Gastrointestinal Cancer Symposium abstracts were searched up until September 15,2013 using the following search keywords:”targeted therapies,rituximab,alemtuzumab,brentuximab,hepatitis,hepatitis

C reactivation,tyrosine kinase inhibitors,imatinib,mammalian target of 或者 rapamycin(mTOR)inhibitors,everolimus,anti-HER therapies,trastuzumab,pertuzumab,lapatinib,antiepidermal growth factor receptor therapies,cetuximab,panitumumab,and ipilimumab”.Papers considered relevant for the aim of this review were selected by the authors.The data about rituximab-induced hepatic flare in hepatitis C virus(HCV)positive patients is controver-sial.However,there is the possibility www.selleckchem.cn/products/NVP-AUY922.html of life-threatening hepatic flare that can develop after HCV ribonucleic acid(HCV-RNA)viral load increases.Routine followup of liver function tests should be advised.Especially in high-risk patients,such as those with baseline chronic active

hepatitis and cirrhosis,and where there are plans to administer Selleckchem CYC202 rituximab concomitantly with corticosteroids,it is advised to have close follow-up of HCV viral load.The data is insufficient to make accurate statements about the association of alemtuzumab therapy and

HCV reactivation.However,alemtuzumab may cause deep immunosuppression.Due to this,it is better to follow up with liver function tests and HCV RNA levels during alemtuzumab therapy.Brentuximab has effects on antibody dependent cellular toxicity and may decrease humoral immunity.Thus,we believe that during brentuximab treatment of HCV infected patients,clinicians may encounter hepatitis C reactivation.There have been no reported cases of hepatitis C reactivation with imatinib therapy.However,there are many reports of hepatitis B reactivation with imatinib treatment.Based on the evidence of hepatitis B reactivation with imatinib and the effects of imatinib on immune system functions,we suggest that imatinib therapy might be a risk factor for HCV reactivation.Anti-human epidermal growth factor receptor 2 therapies are not associated with hepatic flare in HCV infected patients.

应用实时定量PCR技术检测非小细胞肺癌组织miR-34b的表达水平,并且分析其与临床病理参数之间的统计学意义。应用细胞转染技术获得miR-34b高表达细胞,并检测细胞凋亡与细胞增殖。运用免疫组织化学方法探索miR-34b表达与下游蛋白c-Met, p53以及Mdm2之间的相关性。 对于miR-34b在非小细胞肺癌与邻近癌旁组织中的表达差异应用两样本t检验。应用Pearson卡方检验和Fisher精确检验来检验miR-34b表达水平与临床病理参数之间相关关系。应用等级相关检验来检验miR-34b表达水平与phospho-Met, p53(phospho S392)以及Mdm2相关关系。 研究结果：miR-34b在非小细胞肺癌中低表达,并与淋巴结转移负相关(P=0.031). miR-34b通过诱导凋亡抑制肿瘤增殖。非小细胞肺癌中miR-34b表达与c-Met负相关(P=0.012)。 结论：miR-34b影响肿瘤细胞的凋亡、增殖、转移,在肿瘤发展过程中发挥抑制肿瘤的作用；HGF-Met信号通路中p53磷酸化并增强转录活性,上调miR-34b,反馈抑制c-Met。由于p53信号通路参与细胞周期抑制与细胞凋亡,并于其中发挥重要作用,因此miR-34基因可能受到抑癌基因p53的调节,而p53可以通过miR34调节一系列的下游蛋白。另外,miR-34又可以反向作用于p53的mRNA,从而避免p53的连续激活。
目的：实体肿瘤的生长需要足够的血液供应。多年来，血管萌芽被看做肿瘤血管生成的一种独立过程。然而，近年来包括脉管共选择、套叠、招募内皮前体细胞、血管生成拟态（vasculogenic

那个 mimicry，VM）等多种机制在内的肿瘤血管生成模型已被提出。其中，血管生成拟态是指快速增长的肿瘤细胞本身可以形成类似血管样的管道结构。血管生成拟态已在多种实体瘤中得到发现，并且存在血管生成拟态的患者预后往往不佳。 血管生成拟态最早于1999年被用来描述高侵袭性的黑色素瘤细胞具有分化形成复杂细胞表型并获得内皮样性状的独特能力。该过程中生成具有血管样结构的管道，其中含有血浆及红细胞。形态学上的观察显示血管生成拟态富含层粘联蛋白并被肿瘤细胞所包绕，并深入球形的肿瘤组织中。然而，在这富含基质的管道中内皮细胞并未被包括光镜、电镜及免疫组化等多种方法所检测到。随着VM在黑色素瘤中的发现，此后在乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、尤文肉瘤、肾透明细胞癌等多种实体瘤中相继发现。尽管VM的发生率不高，但癌症患者肿瘤组织中VM的存在与转移风险及不良预后相关。

VM网络的出现可以丰富血管萌芽生成理论。VM的出现表明侵袭性的肿瘤细胞具有转变成未分化的原始细胞的能力。基因分析显示生成VM的侵袭性黑色素瘤细胞具有分化成内皮细胞、上皮细胞及成纤维细胞的能力。此外，这些研究显示VE-cadherin、EphA2及laminin5γ2基因在存在VM的肿瘤组织中表达上调。这几种分子及其配体在血管生成中起重要作用。让人惊讶的是在尤文肉瘤组织中表达VE-cadherin和EphA2的肿瘤细胞直接围绕在VM周围。VM的生成依赖其独特的血管生成调控机制，传统的血管生成因子如bFGF和VEGF对VM的生成并不起主导作用。 哪里 肝细胞生长因子受体（c-Met）和它的配体肝细胞生长和离散因子（HGF/SF）在肿瘤的发生和肿瘤血管的生成过程中扮演着非常重要的角色，并参与肿瘤的侵袭和转移。部分研究显示，p-Akt蛋白作为HGF/c-Met通路的下游信号分子参与肿瘤的发生和血管生成，而关于c-Met受体和p-Akt蛋白是否与胃癌血管生成拟态的产生有关，目前还未见相关报道。本文对胃癌中p-Akt蛋白与HGF/c-Met通路的关联性进行初步研究，并进一步探讨p-Akt蛋白与HGF/c-Met通路是否参与胃癌VM的形成及其可能的分子机制。 方法：按照入组标准与排除标准，收集华北石油总医院2003年9月1日至2008年8月18日之间收治的胃癌患者共74例，正常胃组织16例。收集患者的临床相关信息，包括年龄、性别、组织学分型、分化程度、脉管瘤栓有无、侵润深度、淋巴结转移和远处转移情况。应用免疫组织化学法检测肿瘤组织及正常对照组中c-Met受体、p-Akt蛋白的表达情况，应用CD-34和PAS双染法测定VM。应用SPSS13.0统计学软件进行统计分析，c-Met受体、p-Akt蛋白和VM与各临床病理参数之间采用χ2检验；VM在c-Met受体、p-Akt蛋白高表达与低表达组间的差异应用χ2检验；两变量相关性采用Spearman等级相关进行分析。以上均以P＜0.05作为有统计学意义的标准。

VRT752271 结果： 1c-Met受体、p-Akt蛋白在胃癌组与对照组的免疫组化检测结果 在胃癌患者中，c-Met受体的阳性表达率为66.22%（49/74），而在正常胃组织中阳性表达率仅为18.75%（3/16），胃癌组中c-Met受体的表达显著高于正常组（P＜0.05）。胃癌组中p-Akt蛋白的阳性表达率为71.62%（53/74），而在正常胃组织中仅为25%（4/16），胃癌组患者p-Akt蛋白的高表达率显著高于正常组（P＜0.05）。 2c-Met受体、p-Akt蛋白的表达与胃癌各临床病理参数间的关系 c-Met受体在胃癌患者不同性别、年龄、有无脉管瘤栓、原发灶部位、淋巴结转移、远处转移组间的表达无显著差异（P＞0.05）。而c-Met受体在胃癌患者中的表达受不同组织学类型、分化程度、浸润深度及分期的影响（P＜0.05）。p-Akt蛋白在胃癌患者不同性别、年龄、有无脉管瘤栓、不同组织学类型、原发灶部位、远处转移组间的表达无显著差异（P＞0.05）。而p-Akt蛋白在胃癌患者中的表达受分化程度、浸润深度、淋巴结转移及分期的影响（P＜0.05）。 3胃癌患者VM 胃癌患者中存在VM，阳性率为29.73%（22/74），而在正常胃组织中未发现VM的存在，两组间差异显著（P＜0.05）。 4胃癌患者VM与各临床病理参数间的关系 本研究中胃癌患者VM与患者性别、年龄、原发灶部位、淋巴结转移无密切关系（P＞0.05），而与组织学分型、肿瘤分化程度、脉管瘤栓、肿瘤浸润深度、远处转移、分期密切相关（P＜0.

01);低剂量组降低不显著(p＞0.05)。与对照组相比低剂量组与高剂量组pAKT表达均显著降低,高剂量组尤其显著。(3)低剂量组和高剂量组LY294002肿瘤细胞增殖活性(Ki67阳性率)显著低于对照组,以高剂量组尤其显著(均p＜0.05)。(4)FCM检测发现6h和18h不同剂量组、24h低、中剂量组及48h中剂量组均显示肿瘤细胞的细胞周期S期细胞比例较对照略有降低而G1期细胞增加,提示出现G1期阻滞,但效果均不显著(p＞0.05)。24h时高剂量组和48h时低剂量组及高剂量组均显示出S期细胞比例明显降低(p＜0.05),提示出现显著的G1期阻滞。其中对细胞周期阻滞效果最显著的是48h时高剂量处理组。另外本试验也显示,LY294002促细胞凋亡的效果不明显(p＞0.05)。(5)与LY294002或DOX单用组及对照组相比,LY294002与DOX联合组荷瘤鼠较早地出现了对肿瘤生长的明显抑制。联合组的肿瘤体积抑瘤率显著优于任何单用组(p＜0.05);而质量抑瘤率显著优于LY294002单用组(p＜0.05),也优于DOX单用组,其差异达临界统计学意义(p=0.057)。通过检测Ki67的表达分析了LY294002对DLBCL肿瘤细胞增殖活性的影响,结果发现LY294002与DOX联用组的肿瘤细胞增殖活性显著低于对照组和任一药物单用组(均p＜0.01)。

结论: 1.AKT/mTOR信号传导通路活化在DLBCL发生中起重要作用,特别与Bcl6低表达或不表达以及non-GCB亚型密切相关,该信号通路有望成为部分DLBCL治疗的新靶点。 2.在DLBCL中PIK3CD和PIK3CB均高表达并且与pAKT的表达显著相关,提示PIK3CD和PIK3CB可能在DLBCL中PI3K/AKT通路的活化中发挥重要作用。PIK3CB在DLBCL中的表达水平显著高于RH,提示其可能参与了DLBCL的发病机制。PIK3CA基因突变在DLBCL中发生率极低,提示其可能不是DLBCL中PI3K/AKT通路活化的主要机制。 获悉更多 3.本研究成功建立了人DLBCL裸鼠移植瘤模型,为进一步体内研究提供了较理想的动物模型。利用该模型本研究表明LY294002在体内可以抑制AKT活化从而抑制DLBCL肿瘤的生长,并且主要是通过调节细胞周期而非细胞凋亡,同时可以抑制肿瘤细胞增殖活性。另外LY294002在体内也可以增加化疗药物DOX的肿瘤抑制作用。上述结果与本课题组前期体外实验结果相符,为DLBCL的治疗提供了新的理论依据和思路。 本课题的创新性在于: 1.从AKT/mTOR信号传导通路的角度探讨DLBCL的发病机制,目前国内尚无相关研究报道,国外仅有一篇相关报道,且未涉及该通路与分子分型及Bcl6表达等相关性的相关研究。本研究探讨了该通路的两个重要分子AKT和mTOR在DLBCL中的活化及其与DLBCL分型以及DLBCL中重要分子Bcl6表达的相关性,并且初步分析了该通路活化与临床指标以及预后的关系。

2.关于DLBCL中PI3K/AKT通路的活化机制及DLBCL中PI3K 4个催化亚单位的表达水平目前国内外尚未见相关文献报道。本研究采用实时定量RT-PCR的方法从mRNA水平检测了4个催化亚单位的表达,并初步探讨各个亚单位表达与PI3K/AKT通路活化的关系。 Autophagy Compound Library high throughput 3.本研究成功建立了人DLBCL裸鼠移植瘤模型,为进一步体内研究提供了较理想的动物模型;并利用该模型对DLBCL中PI3K/AKT通路的生物学效应进行了研究。目前国内外尚未见相关研究报道。
第一部分舒脉胶囊对心肌缺血大鼠促血管新生的研究

背景 目前,缺血性心脏病使全世界数百万人经受着病痛的折磨。改善心肌缺血在缺血性心脏病的防治研究中具有重要意义。治疗性血管新生可促进缺血组织周边侧支循环的建立,心脏冠脉侧支循环的形成和开放能改善心肌缺血、坏死,延缓缺血性心肌病的形成,改善患者的临床症状和预后,已成为心血管研究领域的热点之一。冠心病的中西医结合防治研究也已从单纯改善病变血管供血转向同时促进侧支循环的建立。中医药益气化瘀的治疗法则及其临床有效性,为中西医结合促血管新生的研究提供了理论和临床依据。 特异性内皮细胞丝裂原血管内皮生长因子(VEGF)家族在血管新生过程中起关键作用。但是,通过单一促血管生成因子诱导产生的新生血管结构以内皮细胞(EC)为主,没有血管平滑肌细胞(VSMC)和周细胞包被形成完整的动脉中膜结构,因此血管容易出血渗出,亦无法输送血流,最终会导致新生血管退化。而血小板衍生生长因子(PDGF)家族成员尤其是PDGF-BB是作用很强的促动脉生成因子,主要作用于血管壁细胞包括周细胞和VSMC。PDGF-BB与细胞表面的酪氨酸蛋白激酶受体结合,募集周细胞和VSMC包绕新生血管网络形成完整的血管结构从而发挥稳定血管的作用。血管生成(angiogenesis)和动脉生成(arteriogenesis)都有助于心脏的血管新生,但对于改善心肌血流量,动脉生成是最重要的过程。 Selleckchem C59 wnt PI3K/Akt信号通路激活在介导生长因子促血管新生的作用已引起重视。PI3K/Akt通过诱导VEGF的表达达到促血管新生的作用。抑制PI3K/Akt信号通路活性可降低VEGF、PDGF受体VEGFR2及PDGFR活性及其作用底物的磷酸化。 随着中西医结合的发展,中药在心血管疾病的防治中的作用越来越受到重视。既往研究表明中药单体成分及复方制剂可不同程度的促进VEGF、bFGF等mRNA及蛋白的表达,从而促进血管新生。但中药对信号通路介导促血管新生的分子机制的研究及对促动脉生成因子的研究仍属崭新的研究领域。 舒脉胶囊是导师根据多年的临床经验研制而成,是大量应用于临床治疗缺血性心脏病的中药复方制剂。本研究通过对心肌缺血(Myocardial ischemia,MI)大鼠缺血心肌组织学、形态学改变的观察,通过超声心动图分析左室心功能,通过实时定量RT-PCR技术检测缺血心肌VEGF、PDGF-BB mRNA的表达,以及通过Western blot检测缺血心肌磷酸化PI3K/Akt、VEGF、PDGF-BB的蛋白表达的改变,通过免疫组化检测缺血心肌微血管密度,探讨舒脉胶囊在缺血心肌中促血管新生的作用,并探讨其信号调控机制,为其临床防治缺血性心血管疾病提供更为可靠的科学依据。 目的 1.通过观察舒脉胶囊对实验性大鼠缺血心肌组织学、形态学及心功能改变,及对毛细血管与微动脉的新生的影响,探讨舒脉胶囊促血管新生的疗效。 2.观察舒脉胶囊对大鼠缺血心肌磷酸化PI3K、Akt蛋白表达,及VEGF、PDGF-BB的蛋白及mRNA表达影响,探讨舒脉胶囊促进稳定而有功能的血管新生的信号调控机制。 方法 1.