1%),主要用于各种类型的组织,包括操作,穿刺或内窥镜检查组织,2小时即可完成检测,试剂盒商业化程度高,临床认可程度高,国内已有试剂盒获批CFDA。q PCR-HRM其灵敏度尚可(1%),需要较高档次的Q-PCR仪,多用于研究中,限制了其临床应用。肽核酸(Peptide Nucleic Acid,PNA)是一种在结构上与DNA有些许近似,但是在碱基组成上又有一点不同的核酸,其骨架由2-氨乙基甘氨酸代替DNA的磷酸二酯糖后形成了一种远比DNA稳定的核酸。PNA十分稳定,正确配对的DNA/PNA的稳定性远远高于相应的DNA/DNA,同时在PCR反应过程中PNA不可作为Taq酶的底物,亦不会被其他酶所降解。对于错配的PNA/DNA,哪怕只有一个碱基的错配,也会造成其融解温度下降9-10℃左右。目前,肽核酸作为一种非常有用分子生物学工具已在疾病的诊断、治疗等领域得到应用。本课题拟在实验室前期摸索出的肽核酸(PNA)压制-PCR/KRAS突变检测法的基础上,将核心的PNA钳制技术转化应用于结直肠肿瘤组织中BRAF突变的检测,有效抑制样本在PCR反应中BRAF野生型基因的扩增,从而提高突变基因的检测灵敏度以及降低检测下限。研究目的探索肽核酸(PNA)抑制-PCR/BRAF突变检测法的诊断界值及其检测下限。研究方法将含BRAF突变的质粒/细胞株DNA和BRAF野生型组织DNA以不同比例(突变/总体:50%,25%,12.5%,6.25%,3.1%,1.6%,0.8%,0.4%,0)混合配制成参考品,独立配制10个批次并分别进行PNA-PCR/BRAF突变检测,整理出BRAF突变CT值及其总体CT值,并计算ΔCT值(突变CT值-总体CT值),运用ROC曲线拟合的ΔCT作为判明BRAF基因突变的最佳诊断界值(Cut-off值),并根据前者得出对应的检测下限。研究结果阳性参考品在不同突变百分率下的突变CT值、ΔCT值与阴性参考品相比有统计学差异(P
乳腺癌的复发和转移是导致女性死亡的主要原因。有研究表明,循环肿瘤细胞不仅可以克服甚至可以利用低切应力的力学微环境进行转移。Caveolin-1(Cav-1)通常定位在细胞膜脂筏部位和caveolae区域,参与完成多种功能,其中包括内吞、转胞吞、胆固醇平衡、机械力传导、细胞信号转导和细胞增殖等。Cav-1的N-末端第14位残基被络氨酸激酶磷酸化后,参与粘着斑的动态变化、细胞的定向迁移、ECM重组和内吞等。Cav-1具有一个脚手架结构域(Caveolin

Silmitasertib溶解度 Scaffolding Domain,CSD),可以与多种蛋白相结合,如Ras/MEK/ERK、G蛋白、PI3K和JAK/STAT等,协助Cav-1与下游信号分子之间的相互作用。有研究表明,caveolae/Cav-1是细胞膜上的一种力学感受器,能对机械拉力和低切应力做出快速反应,但其具体机制仍不清楚。因此,本研究采用平行板流动腔系统(parallel-plate 以及 许多 flow chamber system)模拟癌细胞转移过程中的力学微环境,深入探究caveolae/Cav-1是如何介导低切应力引起癌细胞迁移,及其力学信号转导机制。在本研究中,选用高转移性的乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象。实验结果表明,1.8dyn/cm2和4 dyn/cm2切应力上调了Cav-1的表达,并且可以活化Cav-1Tyr-14。划痕实验和侵袭伪足形成实验结果证实,低切应力能够促进癌细胞的迁移和侵袭形成。采用PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制剂处理细胞之后,细胞迁移能力明显被抑制。然而,用MβCD破坏脂筏结构会抑制Cav-1的磷酸化,抑制了下游PI3K/Akt信号通路的活化。低切应力处理会增加Cav-1在脂筏部位的聚集,增加Cav-1与p85亚基的结合从而活化下游的信号通路。进一步研究发现,低切应力作用还会上调MT1-MMP的表达,引发Cav-1与MT1-MMP共定位于侵袭伪足部位,并大量聚集。进一步通过Cav-1沉默,会显著降低MT1-MMP表达,抑制MDA-MB-231细胞的转移,还会导致下游p85和Akt的磷酸化降低。将转染Cav-1shRNA沉默Cav-1和转染Cav-1

Y14D的稳定细胞系接种的小鼠尾静脉,建立小鼠肺转移模型实验结果表明,Cav-1沉默可以降低癌细胞向肺部的转移,而转染Cav-1Y14D的细胞转移能力明显增加。我们的研究表明,在乳腺癌MDA-MB-231细胞中,caveolae/Cav-1和其下游的信号分子介导低切应力信号传入胞内,促进癌细胞的转移。
背景肺癌是引起全世界肿瘤相关性死亡的主要原因,其引起的肿瘤相关死亡量比乳腺癌、前列腺癌和肠癌引起的死亡数量之和都多。非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer, NSCLC)约占肺癌患者的80%～85%,根据2004年世界卫生组织公布的肺癌组织学新分类,其中最主要的是4种类型的发生率依次为：腺癌31.5%、鳞癌29.4%、小细胞17.8%、大细胞癌9.2%。在肺癌驱动基因发现以前,晚期肺癌的治疗一直以为传统的含铂双药化疗为标准,从2004年EGFR突变基因的发现后,肺癌的治疗进入了靶向治疗时代,越来越多的驱动基因被发现,ALK融合基因、ROS1融合基因、c-MET基因等相继成为非小细胞肺癌靶向治疗的靶点基因。随着肺癌靶向治疗研究的深入,肺癌组织新分类也有了新的进展,在2013年2月11日出版的《临床肿瘤学杂志》(Journal of Clinical Oncology)杂志上,美国纪念斯隆凯特琳医院的William D.

6Ang(1-7)减少NOX和PKC的表达

提取肾小球蛋白,western blot检测显示NT组NOX4、p47phox、PKCβ1显著高于Control组,而Ang(1-7)剂量依赖性减少上述指标的表达,其大剂量的治疗作用与Ang(1-7)联合缬沙坦治疗作用相似,并且优于单纯缬沙坦治疗,A779治疗能阻断Ang(1-7)的作用。体外实验中Ang(1-7)对NOX4和p47phox的作用与动物实验一致。另外,我们分离了HBZY-1细胞膜蛋白和浆蛋白分别检测PKCa和PKCβ1在其中的含量,结果发现在浆蛋白中PKCa和PKCβ1在各组间无显著性差异,而在膜蛋白中,PKCα和PKCβ1的变化趋势与动物实验结果一致。 4.7Ang(1-7)减少TGFβ1Smad3和VEGF信号通路以及IV型胶原的表达 体内体外实验均发现,与Control组相比,NT组的TGFβ1蛋白表达和Smad3磷酸化水平均显著升高。Ang(1-7)、Valsartan和两者联合治疗均能抑制TGFβ1蛋白表达和Smad3的磷酸化水平,且Ang(1-7)的效应呈剂量依赖性,而A779能够阻断其作用。L-Ang(l-7)组和L+V两组的抑制作用强于Valsartan组,而两组间无显著性差异。我们又检测了HBZY-1细胞中VEGF和Ⅳ型胶原的蛋白表达,发现其变化趋势与TGFβ1的变化趋势一致。 4.8Ang(1-7)减少肾小球系膜细胞的增殖 EdU染色观察各组细胞间增殖水平,结果发现与Control组相比,HG组的EdU阳性细胞百分比显著升高。Ang(1-7)、Valsartan和两者联合治疗均能减少EdU阳性细胞比例,且Ang(1-7)的效应呈剂量依赖性,而A779能够阻断其作用。L-Ang(1-7)和L+V两组的抑制作用强于Valsartan组,而两组间无显著性差异。

KU-0063794分子重量 更多 5结论 (1)Ang(1-7)剂量依赖性改善STZ诱导的糖尿病肾病,大剂量Ang(1-7)的肾脏保护作用优于缬沙坦治疗。两药联合应用未发现明显协同效应。 (2)Ang(1-7)介导的肾脏保护机制包括Ang(1-7)减轻NOXs和PKCs介导的氧化应激并抑制TGFβ1Smad3和VEGF信号通路。
研究背景 肿瘤相关巨噬细胞(TAM)是肿瘤间质中数量最多的炎症细胞群体,TAM的浸润在卵巢癌等许多肿瘤发展及转移中扮演着重要角色。TAM受肿瘤微环境影响,常表现为M2型,可分泌生长因子、蛋白水解酶、促血管生长因子及免疫抑制因子等。TAM可通过促血管和淋巴管形成、细胞外基质重建、抑制抗肿瘤免疫反应等促进肿瘤进展。研究表明,TAM与乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌和宫颈癌等肿瘤的预后不良密切相关。TAM来源于外周血单核细胞,暴露在肿瘤微环境中,持续受到肿瘤微环境的影响。研究发现,TAM不仅富集在血管丰富的组织中,在缺氧的组织中也有较高的密度,这种现象在乳腺癌,膀胱癌等肿瘤中存在,但导致这种现象的机制还不清楚。5-LOX是脂氧合酶家族重要的一员,5-LOX代谢产物主要有5-HETE和白三烯等,对巨噬细胞有很强的趋化和促侵袭作用。本研究将探讨缺氧卵巢细胞促进肿瘤相关巨噬细胞浸润的机制,为卵巢癌提供新的治疗策略。 目的 肿瘤相关巨噬细胞在卵巢癌等许多肿瘤发展及转移中扮演着重要角色。肿瘤相关巨噬细胞不仅富集在血管丰富的组织中,在缺氧的组织中有较高的密度,但是导致这种现象的机制还不清楚。本研究将探讨缺氧卵巢细胞促进巨噬细胞浸润的机制。 方法 1.通过免疫组化检测分析5-LOX、HIF-1α和CD68(巨噬细胞)在卵巢癌组织中的表达。 2.分析5-LOX、HIF-1α和CD68(巨噬细胞)的表达与患者临床病理学参数的相关性。 3.采用qRT-PCR, Western blotting、ELISA等方法检测缺氧对卵巢癌细胞5-LOX通路相关蛋白及代谢产物的影响。 4.采用transwell小室检测缺氧卵巢癌细胞5-LOX代谢产物对巨噬细胞迁移与侵袭的影响。

5.采用qRT-PCR、Western blotting、免疫荧光等方法检测5-LOX代谢产物对巨噬细胞MMP-7表达的影响。 6.采用Western blotting检测5-HETE/LTB4上调巨噬细胞MMP-7表达的信号通路。 哪里 7.采用ELISA方法检测5-LOX代谢产物对巨噬细胞分泌TNF-a和HB-EGF的影响。 8.采用裸鼠卵巢癌移植瘤模型,验证齐留通(Zileuton)对肿瘤相关巨噬细胞浸润和MMP-7表达的影响。采用免疫组化及免疫荧光方法检测移植瘤中F4/80、5-LOX、HIF-1α和MMP-7的表达。 结果 1.人卵巢癌组织中5-LOX与HIF-la的表达水平与肿瘤相关巨噬细胞数量具有明显的相关性 为了研究人卵巢癌组织中5-LOX与HIF-1α的表达与肿瘤相关巨噬细胞数量的相关性,我们用免疫组化方法检测了5-LOX、HIF-1α及CD68(肿瘤相关巨噬细胞)在人卵巢癌组织中的表达。通过分析发现,5-LOX的表达与HIF-1α的水平具有明显的相关性,CD68(肿瘤相关巨噬细胞)的水平与5-LOX、HIF-1α的表达具有明显的相关性。这些结果说明人卵巢癌组织中5-LOX与HIF-1α的表达及肿瘤相关巨噬细胞数量具有明显的相关性。在卵巢癌缺氧区域(即HIF-1α高表达区域),5-LOX呈高表达水平,并且肿瘤相关巨噬细胞数量较多。 2.5-LOX表达水平及肿瘤相关巨噬细胞的数量与卵巢癌分期和转移具有相关性 为了研究人卵巢癌组织中5-LOX的表达水平及肿瘤相关巨噬细胞数量与卵巢分期和转移具有相关性,我们分析了人卵巢癌标本5-LOX、HIF-1α及CD68(肿瘤相关巨噬细胞)的表达水平与临床病理学参数的相关性。结果发现,HIF-1α、5-LOX和CD68的表达水平与卵巢癌Figo分期、转移具有明显的相关性,除此之外,CD68与卵巢癌淋巴结转移有明显相关性。这些结果表明人卵巢癌组织中5-LOX的表达水平及肿瘤相关巨噬细胞数量与卵巢癌分期、转移具有明显相关性。 3.

01),细胞内ROS水平显著增强(P<0.01),T-SOD活性、GSH含量明显降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,用依达拉奉和天麻酚性成分C预处理24h,细胞存活率明显升高(P<0.01),细胞内ROS水平下降(P<0.01),T-SOD活性和GSH含量明显升高(P<0.01)。2、与正常组比较,模型组Caspase-3活化程度显著增强(P<0.01),MMP升高,Caspase-9和Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,依达拉奉可降低Caspase-3活化程度(P<0.01),提高MMP,对Caspase-9和Caspase-3的表达均有抑制作用(P<0.05);天麻酚性成分C各给药组均能够抑制细胞内Caspase-3活化和Caspase-9、Caspase-3表达(P<0.05或P<0.01);与正常组比较,模型组P-JNK、P-p38蛋白表达增加(P<0.01);天麻酚性成分C能够抑制P-JNK蛋白表达(P<0.01或P
糖皮质激素(Glucocorticoid,

还有 GC)是由肾上腺皮质合成和分泌的应激激素,其浓度受下丘脑-垂体-肾上腺(Hypothalamic-pituitary-adrenocortical axis, HPA轴)轴的调控。正常生理状态下,糖皮质激素对维持机体神经系统的正常生长发育以及生理和应激状态下内环境的稳定都极为重要。糖皮质激素作为很强的免疫抑制剂参与体内多种代谢过程,调控中枢神经系统的功能。研究证实,应激反应时肾上腺糖皮质激素过度分泌与生殖内分泌疾病密切相关,糖皮质激素能在下丘脑水平扰乱GnRH神经元的正常生理活动,从而抑制其生殖内分泌功能。GC能够通过糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor, GR)介导直接作用于促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone, GnRH)神经元,从而影响GnRH神经元的正常生理活动。下丘脑GnRH神经元上存在GR,同时,应激状态下的糖皮质激素对星形胶质细胞会产生一定影响。星形胶质细胞是神经系统胶质细胞的主要组成部分,近年来的研究发现,星形胶质细胞除了参与中枢神经系统的损伤和神经退行性疾病以及具有巨噬细胞的功能以外,在调控生殖方面也具有重要作用。研究表明,下丘脑星形胶质细胞能够分泌前列腺素E2 购买IKK抑制剂 VII (Prostaglandin E2, PGE2)、转化生长因子β(Transforming growth factor-alpha,

TGFβ)等活性因子,与GnRH神经元上相应的受体结合,促进GnRH的合成和分泌,控制生殖活动。另外,下丘脑星形胶质细胞还能通过黏合分子和GnRH神经元结合,完成信号转导,促使GnRH神经元分泌GnRH,从而调控生殖活动。但是星形胶质细胞能否直接分泌GnRH来控制生殖活动,还未见报道。本实验采用体外培养的大鼠下丘脑星形胶质细胞,探究糖皮质激素对星形胶质细胞分泌GnRH的调控机制。因此,需要获得较纯的下丘脑星形胶质细胞。实验采用重庆市中药研究所提供的1-3日龄的SD新生大鼠,经过原代细胞的分离培养,在经过多次纯化和传代培养获得纯化率达99%以上的星形胶质细胞。经过以上方法所得的星形胶质细胞可为体外研究提供符合要求的细胞。本实验采用体外培养的符合要求的星形胶质细胞,通过免疫荧光,荧光定量PCR, GnRH ELISA试剂盒检验星形胶质细胞是否分泌GnRH,结果显示星形胶质细胞能够分泌GnRH。为了检验GC对星形胶质细胞(Astrocyte, AST)表达GnRH的影响,本实验通过采用10-6mol/L,10-7mol/L,10-8mol/L的GC刺激培养的AST,分别检测10min、20min、30min、40min时AST

DNA Methyltransferase 抑制剂 GnRH水平,选出最佳时间和浓度。结果发现用10-8mol/L的GC刺激培养的AST,在30min时GnRH的表达量与对照组相比显著升高(P
哺乳类动物Caveolin家族是一组具有21-25KD大小的跨膜蛋白,包括caveolin-1,2,3三个成员。其中,cav2目前尚未发现有生理功能,而Cav1和Cav3则可通过抑制细胞内某些酶活性调控很多信号转导通路,参与细胞正常生理功能。近几年的研究显示,在多种组织细胞中都有Cav-1表达,很有可能作为一种肿瘤转移抑制因子,在肿瘤发生发展的病理过程中也扮演着一定角色。例如,研究显示,Cav1表达下调是加剧Lewis肺癌细胞恶性程度、
目的:探讨TGF-β1诱导皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化的可能途径和调控机制。方法:将小鼠皮肤成纤维细胞(野生型和Smad3Knockout型)分为9组:野生型FB组、野生型FB+TGF-β1组、野生型FB+SB431542组、野生型FB+SB431542+TGF-β1组、Smad3KOFB组、Smad3KOFB+TGF-β1组、野生型FB+SB203580+TGF-β1组、野生型FB+PD98059+TGF-β1组和野生型FB+SP600125+TGF-β1组。各组细胞经同步化处理后,直接以TGF-β1刺激或经上述各激酶抑制剂预处理后再以TGF-β1刺激。收集细胞,一部分以单细胞RT-P…
目的:观察福尔马林致口颌面部炎性疼痛大鼠的三叉神经脊束核Vc核中P2X4-p38MAPK通路的变化及p38特异性抑制剂SB203580的镇痛疗效,探讨P2X4-p38MAPK通路在口颌面部炎性疼痛中的作用。方法:选择体重200～250 g健康SD大鼠,在左上唇皮下注射2.

以体外培养的ECV304细胞和双层培养系统制成单层血管内皮细胞模型。 2.实验分组:将细胞分为正常血清组( A组)、正常血清+ SB203580组(B组)、烧伤血清组( C组)、烧伤血清+ SB203580组( D组)、正常血清+重组腺病毒组(E组)、烧伤血清+重组腺病毒组(F组)组、空病毒组(G组)和重组腺病毒组(H组)。 Akt抑制剂 3.构建Caldesmon重组腺病毒载体,包装293细胞,制备重组腺病毒。

4.采用绿色荧光标记的白蛋白,观察A组、B组、C组、D组、E组和F组单层内皮细胞0.5h、1h、2h、4h时的通透性变化。 5. Western blot法检测A组、B组、C组、D组p38、p-p38和p-Caldesmon表达变化以及G组和H组Caldesmon表达变化,利用免疫细胞化学染色观察A组、B组、C组、D组细胞F-actin的形态。 三、主要结果 1.烧伤血清刺激后,单层内皮细胞的白蛋白滤过明显增加,SB203580预处理明显减少了单层内皮细胞白蛋白滤过。 2.正常内皮细胞p38激酶磷酸化水平较低,烧伤血清刺激后,p38激酶磷酸化水平明显增高,SB203580预处理可以明显抑制p38激酶磷酸化水平增高,而p38激酶蛋白表达水平无明显变化。 3.正常内皮细胞F-actin排列成束状,与细胞纵轴大致平行,细胞中央和周边无显著差异。烧伤血清刺激后,细胞F-actin明显重排,细胞收缩变圆,SB203580预处理可以抑制F-actin的重排。 4.成功构建了Caldesmon重组腺病毒载体,重组腺病毒滴度可达1×109U/ml,重组腺病毒感染内皮细胞后Caldesmon蛋白的表达明显增高。 5.重组腺病毒感染内皮细胞明显减少了烧伤血清刺激后单层内皮细胞白蛋白滤过。 6.正常内皮细胞磷酸化Caldesmon蛋白水平较低,烧伤血清刺激后,磷酸化Caldesmon蛋白水平明显增高,SB203580预处理可以明显抑制磷酸化Caldesmon蛋白水平增高。 四、讨论与结论 1.烧伤血清可导致内皮细胞通透性增高,p38激酶活性与烧伤血清导致的血管通透性增加密切相关。 2.细胞F-actin重排是烧伤血清刺激后单层血管内皮细胞通透性增高的重要机制,而内皮细胞F-actin重排受p38激酶调控。 3.成功构建了Caldesmon重组腺病毒载体,且染效率高,能够有效表达目的基因,具有较高的感染力。Caldesmon蛋白在烧伤血清所引起的单层内皮细胞通透性增高中起重要作用。

4.烧伤血清可明显增高内皮细胞磷酸化Caldesmon蛋白水平,而烧伤血清引起的磷酸化Caldesmon蛋白水平增高是由p38激酶活化所致。 5. p38激酶/Caldesmon途径是烧伤血清导致血管通透性增加的重要机制,该途径可能通过调节细胞骨架F-actin重排而发挥作用。这为临床防治烧伤早期低容量性休克和全身缺氧性损害提供了新的思路和实验依据。
目的 Axitinib数据表 高浓度氧(简称高氧)指氧含量高于常压下空气的气体,在新生儿救治中具有重要作用,但因高氧长时间进入肺部后,产生大量活性氧,急性期引起急性肺损伤(ALI),继而引发慢性肺损伤而导致另一并发症支气管肺发育不良(BPD),严重影响患儿生活质量。肺脏是氧化应激性损伤的重要靶器官,目前新生儿高氧肺损伤的发病机制尚未完全清楚,有研究表明,中性粒细胞(PMN)的迅速激活、各种细胞因子(CK)的大量释放和转化生长因子-β1(TGF-β_1)的过度表达等在高氧肺损伤的发生发展及其转归中发挥重要的作用。本实验采用新生大鼠建立高氧肺损伤动物模型,检测p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)的表达,并给予p38MAPK特异性抑制剂SB203580对新生大鼠高氧肺损伤进行干预治疗,检测SB203580干预前后新生大鼠高氧肺损伤模型中白细胞介素-8(IL-8)和TGF-β_1含量的变化,以及肺组织病理学和肺湿/干重比的改变,来探讨p38MAPK在新生大鼠高氧肺损伤中的表达和意义,及其特异性抑制剂SB203580对新生大鼠高氧肺损伤产生保护作用的机制。

没有 方法 160只新生大鼠随机分为Ⅰ空气对照组、Ⅱ高氧组、Ⅲ高氧+SB203580组、Ⅳ高氧+生理盐水组。将Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组新生大鼠暴露于>95% O2,共3 d,同时Ⅰ组置于正常空气中喂养。Ⅲ组从高氧暴露第1 d开始,给予SB203580 5 mg/kg腹腔注射,1/d,共3 d;Ⅳ组给予生理盐水5 mg/kg腹腔注射,1/d,共3 d。在12 h、24 h、72 h和1 w四个时相点处死新生大鼠,进行肺组织病理学检查和肺湿/干重比值(W/D)测定,以Western-blot法检测p38MAPK表达,以酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肺组织IL-8和TGF-β_1的含量。 结果 ①各实验组12 h、24 h肺组织病理学检查均无明显差异。高氧组及高氧+生理盐水组高氧暴露72 h时,肺组织光镜下观察表现为明显的急性炎症和出血,1 w时肺间隔明显增宽,组织结构紊乱。高氧+SB203580组72 h光镜下观察以急性炎症反应为主,1 w时光镜下观察肺泡内炎细胞基本吸收,肺泡发育及结构基本正常。②高氧组与空气对照组相比,肺W/D在12 h和24 h无明显差异,在72 h和1 w高氧组明显高于空气对照组;高氧+生理盐水组与高氧+SB203580组相比,肺W/D在12 h和24 h无明显差异,在72 h和1 w高氧+生理盐水组明显高于高氧+SB203580组。③新生大鼠暴露于高氧12 h时, p38MAPK开始表达,72 h达高峰,后逐渐降低。在高氧暴露72 h时,空气对照组未见p38MAPK表达,高氧组可见p38MAPK表达;高氧+生理盐水组p38MAPK表达明显强于高氧+SB203580组。④在高氧组和高氧+生理盐水组中,肺组织IL-8和TGF-β_1浓度随时间延长呈持续上升趋势,在各时相点均明显高于空气对照组和高氧+ SB203580组(P < 0.

通过测定与分析多种内皮细胞粘附分子和分泌因子的表达水平,包括细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesionmolecule-1, VCAM-1)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, eNOS)、一氧化氮(nitric oxide, NO)和内皮素-1(endothelin,ET-1),从不同角度了解sPLA2-IIA刺激对血管内皮功能的影响。

2.通过观察4-BPB (4-bromophennacyl bromide, sPLA2-IIA水解作用的抑制剂)对sPLA2-IIA诱导的内皮功能影响的变化,以了解sPLA2-IIA的水解作用是否参与了损伤内皮细胞的过程。 3.通过观察PD98059(ERK选择性抑制剂)、SP600125(JNK选择性抑制剂)、SB203580(p38选择性抑制剂)对sPLA2-IIA诱导的内皮功能影响的变化,以了解MAPKinase信号通路是否参与了sPLA2-IIA对内皮细胞的影响。 所以 4.通过观察Bay11-7085(NF-kB选择性抑制剂)对sPLA2-IIA诱导的内皮功能影响的变化,以了解NF-kB是否参与了sPLA2-IIA对内皮细胞的影响。 研究方法： 1.体外分离培养人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells, HUVEC)。 2.不同浓度的sPLA2-IIA体外刺激HUVEC细胞,设置3个浓度(0.01、0.1、1μ g/ml),以未加任何药物刺激培养的细胞作为空白对照,以10ng/ml Wnt agonist TNF-α刺激培养的细胞作为阳性对照,利用试剂盒检测内皮细胞上清的一氧化氮浓度,并利用荧光定量逆转录多聚酶链反应(Real-Time PCR)方法分析一氧化氮合酶(eNOS)、内皮素-1(endothelin,ET-1)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和血管粘附分子-1(VCAM-1)的mRNA表达水平的变化,用Western Blot法分析eNOS、 ICAM-1、VCAM-1在蛋白水平的表达水平变化,用ELISA方法分析ET-1在蛋白水平的表达变化。

3.采用体外分离培养HUVEC的方法,以1μg/ml sPLA2-IIA、10μmol/L4-BPB单独或联合刺激内皮细胞,利用试剂盒检测内皮细胞上清的一氧化氮浓度,并通过Real-Time PCR检测分析eNOS、ET-1、ICAM-1、VCAM-1转录水平的变化,用Western Blot法分析eNOS、ICAM-1、VCAM-1在蛋白水平的表达变化,用ELISA方法分析ET-1在蛋白水平的表达变化。 4.以1μg/ml sPLA2-IIA.1μmol/LPD98059或SP600125或SB203580单独或联合刺激内皮细胞,利用试剂盒检测内皮细胞上清的一氧化氮浓度,并通过Real-Time PCR检测分析eNOS、ET-1、ICAM-1、VCAM-1转录水平的变化,用Western

Blot法分析eNOS、ICAM-1、VCAM-1在蛋白水平的表达变化,用ELISA方法分析ET-1在蛋白水平的表达变化。 Selleck DUB inhibitor 5.以1μg/ml sPLA2-IIA、1μmol/LBay11-7085单独或联合刺激内皮细胞,利用试剂盒检测内皮细胞上清的一氧化氮浓度,并通过Real-Time PCR检测分析eNOS、ET-1、ICAM-1、VCAM-1转录水平的变化,用Western Blot法分析eNOS、 ICAM-1、VCAM-1在蛋白水平的表达变化,用ELISA方法分析ET-1在蛋白水平的表达变化。 6.用SPSS13.0软件进行数据统计分析,组间比较用单因素方差分析(one-way ANOVA)及独立样本t检验,多重比较采用LSD和SNK法。p<0.05),且诱导作用呈浓度依赖性(p<0.01),且呈浓度依赖性(p<0.01,p<0.05),减弱sPLA2-IIA对NO生产的抑制作用(p0.05)。 6. SB203580对1μg/ml sPLA2-IIA诱导ICAM-1、VCAM-1、ET-1蛋白表达增加的影响不显著(P>0.05),对1μg/ml sPLA2-IIA抑制NO生成的影响也不显著(P>0.05)。 7. Bay11-7085干预组细胞的ICAM-1、VCAM-1、ET-1蛋白的表达水平较1μg/ml sPLA2-IIA单独刺激组显著降低(ICAM-1:p0.05)。 结论： 1. sPLA2-IIA能剂量依赖性地影响内皮细胞功能,促进内皮细胞粘附分子和ET-1的表达,并抑制NO的生成。 2. sPLA2-IIA的水解作用参与其对内皮细胞的损伤过程。 3. sPLA2-IIA主要通过MAPKinase ERK和NF-kB通路上调内皮细胞黏附因子的表达,从而影响内皮细胞黏附功能。 4. sPLA2-IIA主要通过MAPKinase的ERK和JNK通路影响内皮细胞ET-1和NO的生成,从而调节血管舒缩状态。NF-kB也在上调ET-1表达中起到重要作用。
背景：急性胰腺炎(acute pancreatitis.

在体动物实验 1.1高脂肥胖大鼠模型的建立及分组：21日龄断乳雄性Wistar大鼠30只,体重65～75g,随机分为对照组、高脂组和烟酸组,每组10只。其中对照组(CG),予以常规商用鼠饲料；高脂组(HF),予以高脂饲料(包括10%猪油、2%胆固醇)；烟酸组(DG),予以上述高脂饲料并烟酸缓释片100mg/(kg-d),采用管饲法,共喂养12周。整个实验期间所有大鼠均自由饮水,各组每周称量体重三次,于实验12周末,分别随机处死8只大鼠取材和检测。 并且 1.2检测指标及方法 1.2.1体重和身长：各组每周测量三次体重和身长。 1.2.2外周血指标的检测：外周血甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)水平采用全自动生化分析仪检测；血清可溶性ICAM-1(sICAM-1)、oxLDL水平采用ELISA方法检测；血清NO水平采用硝酸还原酶比色法检测；血浆内皮素(endothelin, ET)含量采用放射免疫法检测。 1.2.3血管内皮超微结构观察：胸主动脉组织依次经戊二醛、锇酸固定、脱水、包埋,甲苯胺兰超薄切片后行透射电镜铀一铅双重染色,观察主动脉血管内皮细胞超微结构的改变。

1.2.4主动脉壁LOX-1、ICAM-1蛋白表达：冰冻切片免疫荧光染色法定性检测胸主动脉血管壁LOX-1蛋白的表达；石蜡切片免疫组化SP法检测胸主动脉血管壁ICAM-1蛋白的表达。 1.2.5 Western blot方法定量分析主动脉壁LOX-1、ICAM-1蛋白含量：提取主动脉组织标本的蛋白质样品,经变性、电泳、转膜及封闭后,先后加入稀释的LOX-1、ICAM-1一抗及辣根过氧化物酶标记的二抗室温孵育,经ECL显影、凝胶成像分析系统扫描蛋白条带进行光密度分析。以Β-actin作为内参,以目的蛋白/B-actin蛋白条带吸光度值作为蛋白表达强度。

1.2.6逆转录—聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法检测主动脉血管壁LOX-1、ICAM-1 mRNA的表达水平：提取各组主动脉总RNA,将mRNA逆转录成cDNA后行PCR扩增。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳、成像分析。分别以LOX-1、ICAM-1与Β-actin扩增条带吸光度比值作为其：mRNA表达强度。 2.体外细胞试验 2.1人脐静脉内皮细胞模型(HUVECs)的建立与分组：人脐静脉内皮细胞株,用Medium200培养基(内含低血清生长增补剂LSGS)在37℃、5%CO2条件培养箱中培养,用0.125%胰蛋白酶进行消化、传代。内皮细胞呈多角形,单层铺路石状紧密排列。2%台盼蓝染色判断细胞活性,活细胞数占细胞总数96%以上,用于实验。实验分组：(1)阴性对照组：培养基；(2)LPC不同作用时间组：培养基加入终浓度为20μmol/L的LPC,分别培养0、10、30、60 http://www.selleckchem.cn/products/Ispinesib-mesilate(SB-715992).html min及4、8h；(3)烟酸(niacin)不同剂量与10μmol/L的p38-MAPK的抑制剂(SB203580)组：培养基中分别加入终浓度为0、0.25、0.5、1mmol/L的烟酸培养18h, SB203580

10μmol/L培养1h,再分别加入LPC培养8h及24h。各组细胞浓度为5×105／ml,接种于6孔板,每孔1ml。 2.2检测指标及方法 2.2.1 Western blot方法定量分析内皮细胞pp38-MAPK、p38-MAPK、ICAM-1蛋白含量：方法同1.2.5。 Epigenetics合成 Library supplier 2.2.2逆转录—聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法检测内皮细胞ICAM-1 mRNA表达：方法同1.2.6。 2.2.3实时定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase chain Reaction, Real-time PCR)法检测内皮细胞ICAM-1基因的表达：提取内皮细胞总RNA,将mRNA逆转录成cDNA后,在PRISM 7700全自动实时荧光定量PCR仪上进行扩增。反应条件为：95℃15 s,60℃1min,共40个循环。定量分析根据ABI user manual the comparative method计算基因表达相对量,基因表达β-actin标准化公式：ΔCT= CT target-CT refernce,基因表达的不同的信号：ΔΔCt=ΔCt (gene of LPS treated group)-ΔCt (gene of untreated group),基因表达的相对倍数：2-△△CT。 2.2.4细胞免疫荧光方法检测LPC诱导的ICAM-1、NF-κB蛋白表达：将载玻片在使用之前灭菌,一次灭菌并贮存在无菌状态下。用PBS洗涤细胞(400×g离心5min),并重悬于PBS中。调整浓度至1×106／ml；将载玻片固定于甩片机的转头上,然后加入0.

HCMV的包膜糖蛋白及其他多种基因表达产物可通过不同的机制以一定时序激活MAPK通路,调节自身及宿主细胞相应基因表达,以利于病毒完成其生活周期,并参与病毒的致病过程.深入研究MAPK信号转导通路与HCMV感染的关系可为治疗HCMV感染引起的疾病提供新的治疗靶点.
目的探讨肠源性内毒素血症在肝肺综合征发生中的作用。方法用复合因素复制大鼠肝硬化模型。腹腔内一次性注射小剂量内毒素以加重肝硬化动物的内毒素血症。另设正常动物注射内毒素组和甘氨酸拮抗内毒素组加以对照。结果实验第8周末的肝硬化大鼠发生了肝肺综合征。小剂量内毒素一次性腹腔内注射后肝硬化动物肺脏的病理变化加剧;甘氨酸在在体和离体实验中均可明显拮抗内毒素的生物学效应,减轻肝肺综合征的各种病理变化。结论肝硬化动物所伴之肠源性内毒素血症很可能在肝肺综合征发病机制中起重要作用;内毒素直接和其诱导产生的TNF-α等细胞因子在肝肺综合征发病机制中起作用。
本文应用 2_D格子气自动机模拟饱和油水两相的多孔介质的导电特性 .在油水两相界面处 ,引入反射与透射系数来决定粒子的运动状态 ,通过调节反射与透射系数就可以改变油水两相的导电性差异 .用模拟结果考察Archie公式的地层因素F

=Ro Rw 和电阻率增大系数I=Rt Ro,其中 ,Ro 为百分之百饱和水时的岩石电阻率 ,Rw为水的电阻率 ,Rt 为不同流体饱和度时的岩石电阻率 .结果表明F与孔隙度 φ间 ,I与含水饱和度间都存在幂关系 ,并可以表示为F =aφ-m ,I=bS-nw 模拟结果同时证实 :公式中的参数a、m的变化反映了孔隙微观结构的变化 ,参数b、n主要受孔隙度大小和油相分布状态的影响 FGFR pathway .
本文阐述了利用I—net局域网络研制的铁路货运票据信息处理系统,论述了它的主要设计思想、运行环境以及具体的设计与实现。
本文通过理论推导和与实测对比,给出起动阶段垂直和水平振幅计算的实用公式,并补充了压制阶段水平振幅计算公式,可供设计压力机基础时应用。
本文首先根据U.Frisch等人所提出的格子气FHPⅡ模型的要点,建立了该模型的完备的微观动力学(碰撞规则)。在此基础上,对一种CVD问题的简单模型进行了格子气仿真。文中介绍了边界条件和初条件的处理,以及在微机上实现仿真的分段算法。
针对带刚性连接挠性接头、以柔性行星齿轮驱动的工业机械臂,提出了一种新的建模和计算方法。由于接头的灵活性,工作中很容易产生共振,经常导致机械臂运行轨迹产生偏差,为此本文研究了一个以挠性接头连接刚体的N级连接工业机械臂模型,该模型以永磁直流伺服电机和柔性行星齿轮进行驱动。在机械臂动态模型设计过程中,充分考虑了齿轮的周期和齿轮刚度,并以两级工业机械臂为例,仿真了带挠性接头、以行星齿轮驱动的动态机械臂模型。
目的 Cyclopamine溶解度 探讨p38的4种亚型在细胞中的分布以及对外界刺激的反应。方法 应用激光共聚焦显微镜对RAW264.7单核细胞内的4种亚型进行定位观察。结果

p38(、p38(在未受刺激的静息细胞内的荧光强度呈弥散性分布，受脂多糖（LPS）刺激后，细胞核荧光强度明显增强，细胞浆荧光强度降低，提示LPS诱导p38(和p38(磷酸化活化后移位入细胞核。p38(在静息和受LPS刺激后的细胞中均呈散在、弥漫性地分布，提示p38(刺激后无移位现象。静息时，p38(弥散地分布于细胞，刺激后细胞核膜部荧光强度增高，提示受刺激后p38(移位于核膜周围。结论

p38不同亚型在细胞受LPS刺激后移位表现不同，可能与它们在组织和细胞分布的特异性及作用途径有关。
在评述冶金多孔介质传输现象模拟方法的基础上，介绍了近年来以流体离散运动论为背景而发展起来的格子气自动机和格子 Ｌａｔｔｉｃｅ Ｂｏｌｔｚｍａｎｎ模型方法及其发展历程．用 １３—Ｂｉｔ多速正六边形 ＬＧＡ模型和单速多能 ＬＧＡ 模型对冶金多孔介质传输现象模拟的实例表明：ＬＧＡ模型可模拟多孔介质内流体流动的速度场和传热温度场，也能得到渗透率等宏观特征参量，为冶金多孔介质传输现象的模拟提供了新方法．

Objective To elucidate the role of p38 in heat induced apoptosis in the monocytic cell line Raw264 7 Methods Apoptosis was detected using flow cytometric analysis, DNA electrophoresis, Westero blot and a protein kinase assay Results A marked increased in p38 activity was detected 15 min after heating and Selleckchem Hesperadin reached maximal activity 30 min post stimulation, then returned to the pre stimulated level 2 h later The percentage of apoptotic cells was obviously increased 3 h after heating Stimulation of p38 preceded the induction of apoptosis, and the p38 specific inhibitor, FHPI, can inhibit thermal injury induced cell apoptosis Conclusions p38 activation is required for heat induced apoptosis in Raw264 7 cells, and stimulation of the p38 signaling pathway contributes to cell death
人胎肝细胞悬液输注治疗重型肝炎时检测甲胎蛋白对估计预后的意义陈从新，周永兴（第四军医大学唐都医院传染病科，西安７ｌ００３８）关键词病毒性肝炎，胎肝细胞，甲胎蛋白，预后中图号Ｒ５１２．６２人胎肝细胞（ＦＬＣ）悬液输注治疗重型肝炎具有一定疗效［１］．我们…

入院血纤维蛋白原在急性冠脉综合征患者中的表达显著高于稳定性心脏病患者及健康对照组(P350mg/dl)对急性冠脉综合征患者的短期预后(1月)和长期预后(2年)均有显著的独立预测作用。 3.淋巴细胞百分比的低表达(
水体富营养化导致的水华暴发不仅严重毒害水生生物,使整个水体生态失衡,并且能够通过被污染的水产品,农产品或者有毒的饮用水间接或直接危害人类的健康。微囊藻毒素(microcystin,

MC)是水华暴发时蓝藻的一些属产生的次级代谢产物,化学性质稳定,很难将其从水中除去,该毒素具有多种毒性效应,因此深入研究其致毒机理具有非常重要的意义。 LBH589化学结构 微囊藻毒素是一种单环七肽类化合物,其中5个氨基酸为固定成分,X,Y为两种可变氨基酸,由此可产生80多种异构体。微囊藻毒素LR(MC-LR)是微囊藻毒素中存在最为普遍且毒性作用最明显的一种,L,R分别代表亮氨酸,精氨酸。微囊藻毒素的致毒效应表现出明显的器官选择性,肝脏是微囊藻毒素最主要的靶器官。急性暴露于微囊藻毒素引起肝脏肿大,肝内出血甚至肝功能衰竭；流行病学调查表明,低浓度的微囊藻毒素长时间暴露与人群中肝癌的发生密切相关。微囊藻毒素的肝毒性是由于肝脏中表达特殊的有机阴离子转运多肽系统(organic anion transporting polypeptides, OATPs),可将微囊藻毒素大量地转运入细胞。此外,除了肝脏毒性之外,微囊藻毒素还具有肾毒性、肠毒性、生殖毒性、神经毒性,引起肾上腺,肠道相关疾病、生殖系统以及神经系统损伤等。 对微囊藻毒素致毒机理的研究表明,微囊藻毒素能够引起细胞骨架的改变、诱导细胞凋亡、诱导活性氧(ROS)生成引起脂质过氧化、激活细胞内信号传导通路等多种细胞效应。MC-LR是蛋白磷酸酶2A

(Protein phosphatase 2A,PP2A)的强效抑制剂,对PP2A的特异性抑制可能是造成其毒作用机制错综复杂的原因之一。然而到目前为止,微囊藻毒素进入肝细胞后,引发的可能与PP2A相关的细胞效应以及各个细胞效应间的联系并不十分清楚。尽管目前蛋白质组学大量筛选出了可能是微囊藻毒素抑制PP2A后的下游靶点蛋白,但是这些结果并不能动态和全面的反应PP2A下游的细胞效应以及各个效应之间的联系。以肝细胞为模型来探究微囊藻毒素致毒机理的研究也非常少。 很少 因此,为进一步探索以PP2A为主线的微囊藻毒素毒可能引起的细胞效应以及各个细胞效应间的联系,在本研究中,我们应用人肝细胞系HL7702为模型,以蛋白磷酸酶PP2A为线索,探索MC-LR抑制PP2A活性后可能引起的下游靶蛋白变化和肝细胞内的MC-LR应激效应,并试图构建以PP2A为中心的肝细胞暴露于MC-LR后的细胞内应答通路,为微囊藻毒素的致毒机理提供更多的依据。 本研究的检测内容主要包括两个部分。第一部分检测MC-LR引起的肝细胞内细胞效应,主要内容包括：检测MC-LR对蛋白磷酸酶PP2A活性的影响；MC-LR对MAPK家族蛋白的影响；MC-LR对细胞骨架以及一些骨架相关蛋白的影响；MC-LR对细胞周期的影响；MC-LR对细胞存活力的影响。第二部分检测MC-LR引起的细胞效应之间的联系,主要包括：应用PP2A激活剂D-erythro-Sphingosine(DES)后对PP2A下游影响的验证；应用MAPK激酶抑制剂检测MAPK对下游靶点的调控。

第一部分主要结果： 1. MC-LR暴露于HL7702细胞后,与PP2A催化亚基结合,抑制PP2A活性。 2. MC-LR暴露于HL7702细胞后,引起MAPK家族p38MAPK, ERK和JNK蛋白磷酸化水平升高；并且ERK, JNK的磷酸化修饰早于p38 MAPK。 3. MC-LR染毒HL7702细胞引起乙酰化微管蛋白表达降低；引起酪氨酸化微管蛋白在细胞内的排列变化；引起微丝和微管在细胞内的排列改变。 4. MC-LR染毒HL7702细胞引起Tau, HSP27, VASP蛋白磷酸化表达增加；影响Tau, HSP27在细胞骨架部分的分布。 5. MC-LR染毒HL7702细胞引起细胞周期相关蛋白p53,cdc2,cdc25c的磷酸化修饰发生改变,但是并没有引起细胞周期改变。 6.在本研究条件下,MC-LR染毒HL7702细胞并没有影响细胞存活力。 第二部分主要结果： 1.应用PP2A激动剂DES作用于细胞后,DES能够减弱MC-LR引起的Tau蛋白,HSP27的磷酸化升高效应。DES能够降低细胞周期相关的p53,cdc25c,cdc2的磷酸化水平。 2.应用免疫荧光技术分别检测B55α、B56α与细胞周期相关蛋白的共定位,结果在MC-LR处理细胞组B56α和磷酸化cdc25c出现共定位,并且共定位更多的集中在细胞膜下皮质层的胞浆中。 3.分别应用MAPK抑制剂后,验证HSP27,Tau的磷酸化水平改变,结果显示：p38 CDK抑制剂 MAPK和JNK抑制剂能够减低HSP27的磷酸化修饰水平；p38MAPK抑制剂能够减低Tau的磷酸化水平。 主要结论： 1. MC-LR染毒HL7702细胞后,能够与PP2A催化亚基结合,抑制PP2A的活性。 2. MC-LR染毒能够激活MAPK三条经典的信号通路p38MAPK通路,ERK通路,JNK通路；但是p38 MAPK通路对MC-LR的反应敏感性低于ERK和JNK通路。 3. MC-LR通过影响乙酰化微管蛋白、酪氨酸化微管、F-actin和微管重新排列而引起细胞骨架的稳定性下降；PP2A被抑制激活p38MAPK引起下游Tau的磷酸化增加,从而影响Tau稳定微管的功能；p38 MAPK和JNK激酶调节下游HSP27蛋白,使HSP27蛋白磷酸化表达增加来抵抗骨架的损伤。 4. MC-LR能够通过PP2A影响细胞周期相关的蛋白p53,cdc25,cdc2的磷酸化水平改变,但是对细胞周期、细胞存活力没有影响,提示蛋白的变化早于细胞效应的改变。 5.

05),与此对应的是增加成纤维细胞标志物α-SMA、desmin和vimentin的表达(p<0.05)。TGF-β1显著增加A549细胞磷酸化的p38MAPK和磷酸化的JNK蛋白的表达(p<0.05);JNK的特异抑制剂SP-600125和p38MAPK特异抑制剂SB-203580,均可以抑制A549细胞向间质细胞转分化,显著抑制(p<0.05)TGF-β1诱导的A549细胞α-SMA、结蛋白和波形蛋白表达,与此对应的是可阻止(p<0.05);p38MAPK和JNK基因沉默均可以抑制A549细胞向间质细胞转分化,可以显著抑制TGF-β1诱导的A549细胞α-SMA、结蛋白和波形蛋白表达(p<0.05),与此对应的是可阻止TGF-β1诱导的A549细胞E-钙粘素、ZO-1和AQP-5减少(p<0.05)TGF-β1诱导的A549细胞E-钙粘素、ZO-1和AQP-5减少,显著减少活性MAPK蛋白(磷酸化的JNK和磷酸化的p38MAPK)的表达(p
传统的观念认为病理性血管重构的发生是一个“由内而外”的过程，由内管内皮细胞损伤始动，继而血管平滑肌细胞(vascular

所以 smooth muscle cells，VSMCs)增殖，并合成、分泌大量细胞外基质(extracellular matrix，ECM)蛋白，最终导致血管结构和功能的改变。然而，通过抑制内皮损伤和对抗VSMCs增殖来进行的治疗性研究并没有完全阻断病理性血管重构的发生。近年来，血管外膜在血管重塑中的作用越来越受到人们的重视，并且提出“由外而内”的血管损伤重构假说，其中心观点认为血管损伤发生后，外膜是血管壁的第一感知部位。无论血管损伤是否累及外膜(严重与否)，对损伤反应活跃的细胞最先出现于血管外膜。血管外膜成纤维细胞(adventitial

fibroblasts，AFs)是血管外膜中最主要的细胞成分，其在各种病理性损伤刺激下转化为肌成纤维细胞(myofibroblasts，MFs)，MFs是一种具有平滑肌细胞特征的成纤维细胞，表达平滑肌肌动蛋白-α 更多 (smooth muscle α-actin，α-SMA)，可以产生ECM和多种生物活性因子，MFs增殖并迁移至中膜和内膜，参与新生内膜形成及血管重塑过程。 E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes，CREG)是一个新近发现的血管稳态调控因子，其在成熟分化的组织和细胞中广泛表达，但在去分化组织或细胞，如鼠胚胎干细胞、人畸胎瘤细胞、造血干细胞和去分化表型VSMCs中却呈明显低表达或无表达状态。CREG可直接与外源性腺病毒蛋白E1A及哺乳动物体内转录因子E2F家族蛋白竞争性地结合在靶基因的启动子上，从而阻遏E1A和E2F对靶基因的激活作用，因而推测CREG可能通过与E1A、E2F竞争性抑制作用而起到促进细胞分化、抑制细胞增殖的作用。研究发现，在无特异性诱导剂存在的情况下，CREG仍可以单独诱导体外培养的畸胎瘤细胞向神经细胞分化。另外，CREG还具有维持心肌细胞和小肠上皮细胞成熟稳态、对抗病理性细胞损伤发生的生物学功能。本实验室前期系列研究证实，CREG基因在成熟分化的VSMC中大量表达，能够维持VSMC分化、阻遏在体损伤后VSMC向去分化表型转化并抑制新生内膜形成。因此，CREG是参与维持组织及细胞成熟分化稳态的重要调控因子。 3-MA溶解度 丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPKs)信号转导通路是生物体内广泛存在的一类丝/苏氨酸蛋白激酶，参与介导细胞生长、发育、分裂和分化等多种生理及病理过程。在哺乳动物细胞中MAPKs亚族主要包括细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular

signal regulated protein kinase1/2，ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Junamino-terminal kinase1/2，JNK1/2)和p38-MAPK。我们研究室前期在研究CREG调控人VSMCs凋亡过程时发现，CREG过表达通过抑制JNK1/2和p38-MAPK信号转导通路的激活来阻止药物诱导的离体培养的人VSMCs凋亡，同时，外源性添加CREG蛋白也能够抑制JNK1/2和p38-MAPK信号转导通路的激活来缓解球囊损伤诱导的人冠状动脉血管中VSMCs的凋亡。另外，关于CREG基因的其他研究小组也相继证实，CREG抑制心肌肥厚、纤维化和炎症作用的机制与ERK1/2信号转导通路密切相关。综上所述，CREG可作为MAPKs信号转导通路的上游调控子来影响多种组织细胞的生物学行为。 本研究拟在整体和细胞两个水平复制AFs细胞表型转化模型，运用形态学、细胞生物学、分子生物学等技术，围绕血管损伤后CREG基因表达对血管外膜增生、AFs细胞表型转化，以及MAPKs信号转导通路在其中发挥的调控作用等方面的问题进行研究，以期通过阐明CREG基因对AFs细胞表型转化的调控作用及其机制，为拓展防治血管重塑性疾病的新思路奠定基础。 本课题的主要研究内容和结果如下： 1.

7%和3.9%。在34例PIX3CA突变中,17例伴EGFR突变,4例伴KRAS突变。PIK3CA基因突变与PI3K P110α(p=0.0001), p-Akt(p=0.024)以及mTOR(p=0.001)表达呈正相关,但与PIK3CA基因拷贝数无明显相关性(p＝0.463)。仅存在PIK3CA突变患者的总生存时间较pIK3CA-EGFR/KRAs共突变者明显缩短(p=0.004)。在无EGFR/KRAS突变的亚组,PIK3CA突变提示预后不良。本部分研究成果表明,中国人非小细胞肺癌患者PIK3CA基因突变多合并有EGFR或KRAS突变；单一PIK3CA突变提示预后不良：无EGFR/KRAS突变亚组PIX3CA突变提示预后不良。本课题的研究结果可以对临床肺癌癌基因驱动突变筛选提供参考,有利于PIK3CA靶向药患者选择及判断预后,具有临床实用性。第二部分中国人非小细胞FGFR融合基因研究肺癌是世界范围内最常见的癌症致死原因,占所有肿瘤死亡病例的约18%。其中,非小细胞肺癌占所有肺癌的85%左右,大部分非小细胞肺癌患者在被发现时已为晚期从而失去手术根治的机会。随着对非小细胞肺癌遗传学研究的深入,针对特定驱动突变的靶向药物已被证明可以使肿瘤产生明显的消退,并显著延长患者无疾病生存期。近来,致癌融合基因如RET融合基因抑制剂凡德他尼(Vandetanib)和卡博替尼(Cabozantinib),ALK与ROS1融合基因抑制剂克唑替尼(Crizotinib)已被证明可有效治疗特定亚型的肺癌。但是,东亚人群中,仍然有30%的吸烟肺腺癌和88%的肺鳞癌尚没有明确驱动基因突变／融合。新近研究表明,成纤维细胞生长因子受体(FGFR)融合基因与肿瘤生成密切相关,靶向于FGFR的抑制剂有明显抗肿瘤作用并已进入前期临床试验。然而对非小细胞肺癌FGFR融合基因及与其他驱动基因关系的研究罕有报道,中国人非小细胞肺癌FGFR基因融合情况仍不十分清楚。弄清以上问题,将有利于了解中国人群FGFR融合基因现状并有助于FGFR靶向药物患者选择。本项研究第二部分回顾分析复旦大学附属肿瘤医院1328例临床非小细胞肺癌手术切除新鲜冰冻标本,提取RNA,逆转录为cDNA后进行RT-PCR。直接测序检测FGFR1,FGFR2,FGFR3基因融合情况,并分析患者EGFR.KRAs,HER2和BRAF突变、ALK、RET、RoS1融合基因情况以及患者临床病理特征。对研究中发现的FGFR融合基因突变标本与野生FGFR对照标本(连续收集自2011年7月至2012年12月的肺鳞癌样本),以免疫组织化学法(immunohi

哪里 http://www.selleckchem.cn/products/Nilotinib.html stochemical, IHC)检测FGFR1，FGFR2,FGFR3表达。研究发现,1328例非小细胞肺癌中有17例FGFR融合基因,其中15例为FGFR3-TACC3,2例为BAG4-FGFR1,并且与其他基因突变/融合不共存。有吸烟史(P3cm

(P<0.001)患者更易出现FGFR基因融合,腺癌FGFR融合基因样本中多含实体亚型。FGFR融合基因状态与免疫组织化学表达呈正相关,FGFR基因融合与患者的总生存时间以及无复发生存时间无明显相关性。本课题的研究成果表明,中国人群中1.3%的非小细胞肺癌、3.50%的肺鳞癌中存在FGFR基因融合。肿瘤最大径大于3厘米的吸烟鳞癌患者更易出现FGFR融合基因。本课题的研究结果可以对临床肺癌癌基因驱动基因突变／融合筛选提供参考,有利于FGFR靶向药患者选择及判断预后,具有临床实用性。
研究背景肾细胞癌(renal 不 cell carcinoma, RCC)是泌尿系统常见的恶性肿瘤,近年来发病率呈持续上升趋势,严重威胁人类生命健康。肾细胞癌常发病隐匿,约30%肾细胞癌在初次诊断时已发生转移。肾细胞癌对放化疗不敏感,根治性手术切除是其唯一有效的治疗方式,但是术后肿瘤复发转移率仍较高。肾细胞癌转移(metastatic renal cell carcinoma, mRCC)预后不良,5年生存率<0.001,P<0.001)；同时,肾细胞癌转移灶组织PIK3R1基因蛋白表达量亦显著低于肾细胞癌原发灶组织PDGR1蛋白表达量(P<0.001,P<0.001)。786-mut1和786-mut2细胞的PIK3R1基因蛋白表达量也降低。与野生型细胞相比,A-704-mutl和A-704-mut2细胞的PIK3R1基因mRNA的表达量亦均显著下降(P<0.001,P<0.001)。A-704-mut1和A-704-mut2细胞的PIK3R1基因蛋白表达量也降低。与野生型细胞相比,786-mutl和786-mut2细胞的平板克隆数均显著性增加(P<0.001,P<0.001)。与野生型A-704细胞相比,A-704-mut1和A-704-mut2细胞形成的干细胞球数亦均显著增多(P<0.001,P<0.001,P<0.001)、(P<0.001,P

<0.001,P<0.001)、(P<0.001,P<0.001)、(P<0.