05)。划痕试验显示其侵袭性也明显增高。CAF培养基培养的KYSE-150细胞对各个浓度的顺铂及紫杉醇的抗性较KYSE-150明显增强，克隆形成试验显示其放疗抗性亦明显增强，差异有统计学意义(P
目的：构建小鼠环孢素肾病(CCN)模型,通过特异性抑制TGF-β1,观察Smad2/3、

ILK信号蛋白变化,评估TGF-β1/Smad/ILK信号通路在CCN小管间质纤维化中的作用。 方法：BALB/c小鼠50只随机分成5组(10只/组)：环孢素模型组(CMG)、干预模型组(IMG)、溶媒对照组(SCG)、低盐对照组(LCG)和正常对照组(NCG)。CMG与IMG组采用低盐饲养并环孢素60mg/(kg.d)灌胃,从第28天腹腔给予TGF-β1特异抑制剂SB-43154210mg/(kg.2d)。38天后处死小鼠,取血清测定血肌酐(SCr)；取肾脏组织常规染色观察病理变化,碱水解法检测Hyp水平,免疫组化观察TGF-β1、磷酸化Smad2/3(P-Smad2/3)、ILK着染情况,RT-PCR检测TGF-β1、Smad2/3及ILK mRNA表达,Western Blot检测ILK蛋白表达。 结果：①两个环孢素模型组(CMG和IMG)小鼠体重显著下降(P<0.01)、SCr显著升高(P<0.05)。②肾脏病理显示三个对照组(NCG、LCG和SCG)小鼠肾脏结构无明显异常,但两个环孢素模型组小鼠肾小管结构不同程度损伤,间质炎性细胞增多,蓝色胶原染色不同程度增多,CMG组小鼠肾脏病变尤其明显。③三个对照组肾脏Hyp水平无明显差异,但两个环孢素模型组肾组织Hyp水平明显增多(P<0.01),IMG组Hyp低于CMG组(P<0.01),突出表达于小管间质,IMG组上述因子免疫着染程度低于CMG组(尸<0.01),ILK表达上调低于CMG组(P<0.01),但IMG组ILK表达上调低于CMG组(P
目的 通常 或者 牙周炎的致病因素复杂,并受全身防御机制的调控和各种局部因素的影响。牙合创伤作为牙周炎的局部促进因素可加重牙周病的进展,因此,明确应力在牙周组织适应性改建中的作用机制对于牙周炎病因病理机制的研究具有重要意义。目前研究认为,TGF-β1,不仅参与了牙周组织的发育、牙齿移动、牙周炎症、免疫调节及牙周组织再生等一系列生理病理过程,还对牙周膜间隙的维持、牙周膜细胞的分化和增殖,细胞外基质的合成及降解等起重要的调控作用。然而,这种细胞因子在应力介导的HPDLF增殖中的生物学变化规律及其调节机制尚未得出明确结论。本研究拟在成功构建牙周膜成纤维细胞体外培养-力学刺激模型的基础上,研究周期性张应力对HPDLF增殖的作用,探讨TGF-β1的表达与HPDLF增殖之间的关系,明确周期性张应力介导的TGF-β1对HPDLF

I型胶原mRNA表达的影响。本课题有望揭示周期性张应力介导的牙周膜适应性改建的分子机制,为深入研究咬合创伤的致病机理与牙周炎的关系提供理论依据,为咬合创伤及牙周炎基因治疗关键靶点的筛选提供实验基础。 方法 本实验以体外培养的人牙周膜成纤维细胞为研究对象,利用多通道细胞牵张应力加载系统,构建人牙周膜成纤维细胞体外培养-力学刺激模型。实验组分为施加周期性张应力(加力幅度为10%,频率为0.1Hz)2h组、6h组、12h组、24h组,以不加力组(0h)为对照组,观察各组细胞形态变化；利用CCK-8检测细胞增殖活性；利用ELISA检测各组TGF-β1的表达；并应用TGF-β1特异性抑制剂SB431542,利用RT-PCR检测技术检测周期性张应力作用下TGF-β1对工型胶原基因表达的影响。采用SPSS17.0统计分析软件对检测结果进行分析,P<0.05),组间比较通过LSD统计方法差异有统计学意义(P0.05),6h表达活性增强,12h达到本次实验的峰值(P<0.05),24h表达活性明显降低(P<0.05),其变化趋势同加力后细胞增殖的变化；加入抑制剂的对照组和12h组分别与不加抑制剂的该两组相比,CCK-8检测细胞增殖受到抑制,差异均有统计学意义(P
目的复制20mJ·cm-2UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型、iNOS瞬时转染HaCaT细胞模型,从诱导型一氧化氮合酶(iNOS)/一氧化氮(NO)角度、转化生长因子β(TGF-β)/信号转导分子(Smads),研究扇贝多肽(Polypeptide

www.selleckchem.cn/products/GDC-0941.html from Chlamys farreri, PCF)抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法复制20mJ·cm-2UVB诱导HaCaT细胞凋亡模型。利用阳离子脂质体(LipefectimeTM2000)法建立iNOS瞬时转染HaCaT细胞模型。实验设计分组：对照组、UVB模型组、UVB+TGF-β受体抑制剂SB431542组、UVB+iNOS特异性抑制剂SMT组、UVB+NO清除剂Carboxy-PTIO组、UVB+1.42～5.69mmol·L-1PCF组、iNOS瞬时转染组。Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡率：Real-Time PCR检测TGF-β、Smad2、Smad3、 Smad4、Smad7mRNA的经时(0、3、6、10、12、15、18、24h)表达；蛋白质印迹法检测TGF-β、p-Smad2/Smad3、iNOS在UVB辐射损伤HaCaT细胞后细胞内的经时(0、3、6、10、12、15、18、24h)变化。结果Hoechst33258荧光染色检测UVB损伤HaCaT细胞后18h的凋亡率约为40%；mRNA的经时表达显示UVB辐射后Smad2和Smad3表达量与辐射前相比差异无统计学意义(P>0.05),Smad4mRNA表达于12h开始升高,而Smad7mRNA表达于Oh升高后下降,12h达高峰；蛋白经时变化显示TGF-β于20mJ·cm-2UVB照射后孵育3h可检测到表达量达峰后下降(P＜0.01),18h达第二次高峰,而p-Smad2/Smad3在UVB照射后孵育3h开始升高,12h,15h蛋白表达量达高峰(P＜0.01)；iNOS蛋白表达6h开始升高,18h,24h达高峰；iNOS瞬时转染模型中,TGF-β蛋白表达与非转染组相比显著升高(P<0.

05),对照组、脊髓损伤组和治疗组三组以空间定位方式找寻目标平台所占比例分别为77%、48%和56%。免疫荧光及Western blotting结果显示:脊髓损伤组海马齿状回细胞内Caspase3和Bax蛋白表达增多,且MP能降低这两种蛋白表达。HE染色和尼氏染色结果显示对照组海马并未见明显病理改变。脊髓损伤组和治疗组1W时均可见到内有少量细胞形态异常,但随时间延长,海马内形态异常细胞逐渐增多,存活细胞逐渐减少,且治疗组存活细胞数量显著多于损伤组。结论脊髓挫伤可引起大鼠海马齿状回细胞凋亡、消失,从而导致大鼠学习记忆功能障碍,MP能抑制脊髓损伤后大鼠海马齿状回细胞凋亡,改善脊髓损伤大鼠的学习记忆功能。
癌症是一种涉及多因子和多通路的复杂疾病。目前,临床上使用单个抗癌药物进行癌症治疗的方法往往会产生药物抗性和毒副作用。因此,联合用药疗法应运而生并受到了研究人员和临床医生的极大关注,特别是具有协同作用的联合用药研发。协同作用联合用药展现出了比单个药物治疗效力相加更强的功效,同时由于联合用药中的药物剂量比单个药物应用时剂量要小,且联合用药会同时作用于多个药物靶点及生物通路,因此会减少毒副作用的产生。高通量测序技术的发展为我们提供了大量测序数据,促进了生物信息学联合用药的研究。因此,我们提出了利用病人全基因组测序数据进行精准联合用药预测的模型PDCP,并建立了相关应用平台。首先,PDCP分析病人体细胞突变数据及拷贝数变异数据,提取突变位点及突变基因,并筛选其中的药物靶点进行后续分析。然后,在人类基因相互作用网络中计算各药物靶点的重要性,并筛选出对疾病具有重要性的药物靶点进行进一步分析。之后,两两组合步骤二中得到的基因集并结合基因相互作用网络对每对基因对计算其协同作用得分,进行排序并筛选出最具治疗潜力的双靶点协同基因作用对。最后,根据所得的基因对,结合药物基因关系,给出病人个性化联合用药方案。同时,PDCP预测系统针对每个联合用药作用对分别计算了其治疗相似性和副作用相似性参数,以评估其对肿瘤治疗的疗效。本文整合了多个数据来源,包括Reactome、the

所以 NCI-Nature Curated PID、KEGG等建立了人类基因相互作用网络。并收集整理了多种数据来源的药物基因相关性信息以及药物与突变位点相关信息、癌症驱动基因集等数据进行病人精准联合用药的预测分析。为了评估该方法的有效性及预测性能,我们收集了TCGA中发布的8种癌症数据集,包括浸润性乳腺癌、结肠癌、肝癌、肺腺癌、肺鳞状细胞癌、卵巢癌、胰腺癌和前列腺癌数据集,对每个数据集的样本分别进行了联合用药的预测,结合合成致死基因对和已报道的联合用药对结果进行了评估。实验说明PDCP能够正确预测出病人合理的联合用药方案,并且产生出大量候选联合用药供研究人员进行后续研究,促进了我们对复杂疾病的多靶点治疗和精准医疗的系统性了解。
背景与目的 卵巢癌因其发病隐匿，治疗效果一直欠佳，为死亡率最高的妇科恶性肿瘤。在美国每年约有23,000名新增病例，15,000名死亡病例[1]。卵巢癌的治疗主要依靠肿瘤细胞减灭术，术后给予以铂类药物为基础的联合化疗。但是化疗副作用以及化疗耐药的问题使得卵巢癌的预后仍然较差。在过去的30年里，其5年生存率仍不足40%[2]。因此寻找新的有效的治疗方案成为卵巢癌治疗急需解决的问题。

研究发现信号通路调节的紊乱与异常是肿瘤发生、发展及化疗耐药的重要原因，其中mTOR信号通路与细胞的生长增殖尤其是肿瘤细胞的失控性增殖，肿瘤的复发转移及耐放化疗密切相关，多种恶性肿瘤包括乳腺癌、白血病、胃肠间质肿瘤、肝细胞癌、肺癌等均存在mTOR信号通路的失调[3-9]。而雷帕霉素靶蛋白mTOR，处于此条通路的中心环节，与蛋白质合成及细胞周期的调控密切相关[10]。因此针对于mTOR位点的特异性抑制剂成为肿瘤靶向治疗新的热点。 www.selleckchem.cn/products/nlg919.html 雷帕霉素作为mTOR的特异性抑制剂，是从吸水性链霉菌发酵液中提取出的一种大环内酯类抗生素，最初发现其具有抗真菌作用，1989年被FDA批准作为免疫抑制剂应用于临床，近年来研究发现其具有显著的抗肿瘤作用[11]，联合传统化疗药物可明显提高化疗药物的促凋亡能力，增强肿瘤细胞对于化疗的敏感性[12]。顺铂是肿瘤化疗中最常用的化疗药物，是临床上实体肿瘤包括卵巢癌，化疗方案中最有效的药物之一，顺铂的抗肿瘤作用机制是与肿瘤细胞的DNA形成DNA-顺铂交联，引起DNA损伤，抑制DNA复制，促进细胞凋亡~([13])，雷帕霉素可抑制DNA损伤修复蛋白的合成，进一步促进顺铂的促凋亡能力。因此我们推测在卵巢癌细胞化疗时给予雷帕霉素可增加顺铂的抗增殖、促凋亡等抗肿瘤作用，增加肿瘤细胞对顺铂的化疗敏感性。 本研究选用最常见的卵巢浆液性囊腺癌细胞株SKOV3，观察雷帕霉素联合顺铂对于细胞株增殖凋亡、周期分布的影响，初步探讨分子靶点药物与传统化疗药物联合应用的效果及相应的分子机制，寻求卵巢癌治疗更加有效的化疗方案。

selleck公司 方法 体外培养卵巢癌SKOV3细胞，MTT法检测雷帕霉素、顺铂单独及联合作用24h、48h、72h对细胞生长增殖的影响；FCM检测对于细胞凋亡及周期分布的影响；Western blot检测其对mTOR信号通路中PTEN、AKT、mTOR、p-mTOR、S6K蛋白及抗凋亡蛋白Bcl-2表达的影响。 结果 MTT结果显示：雷帕霉素单独作用可抑制细胞生长增殖，呈现明显的时间依从性，以72h抑制率最高，且各组之间两两比较均有统计学意义（P＜0.05）。联合顺铂时生长抑制率明显高于单独用药组，差异有统计学意义（P＜0.01）。合成指数CI＜1，表明两药联合应用有协同效应。FCM显示：雷帕霉素与顺铂单独应用即可促进细胞凋亡，凋亡率呈现明显的时间依从性，72h达到最大值；单用雷帕霉素凋亡率较低，且24h凋亡率与对照组比较无统计学意义（P＞0.05），其他各组与对照组比较均有统计学意义（P＜0.05），两药联合应用时其诱导凋亡能力明显增强。单用雷帕霉素作用24h可引起SKOV3细胞G1期延长，但与对照组比较无统计学差异（P＞0.05），S期与G2期细胞逐渐减少。随作用时间的延长，细胞G1期比例逐渐增加，联合顺铂作用效果明显高于单独用药组，各组与对照组比较均有统计学差异（P＜0.05）。Western blot结果显示：雷帕霉素作用可引起PTEN表达上调，mTOR、p-mTOR及Bcl-2表达下调；作用24h AKT表达上调，随着作用时间的延长(48h,72h)，其表达逐渐下调；S6K表达无明显变化。各组与对照组比较有统计学差异（P＜0.

05%透明质酸酶和0.2%Ⅱ型胶原酶)获得分散的大鼠肋生长板软骨细胞(rat costochondral growth PLX4032细胞系 plate chondrocyte,RGC),常规接种,单层培养。对原代～第5代RGC进行生长动力学分析,并通过免疫细胞化学、阿尔新兰染色和Western blot检测原代～第5代RGC中Ⅱ型胶原、α-SMA和蛋白多糖的分布和表达。 结果:原代培养的生长板软骨细胞中95%以上的细胞Ⅱ型胶原阳性染色,细胞核周围和细胞膜周边都有Ⅱ型胶原的阳性染色,阳性染色的纤维包裹着细胞核,保持圆形的细胞强阳性染色。随着传代次数的增加,表达Ⅱ型胶原的细胞比例和表达量下降,第6代RGC中仅保持圆形的细胞仍呈阳性染色。原代培养的RGC表达大量的蛋白多糖,阿尔新兰阳性染色。第2,3代阿尔新兰染色减少,3代后阿尔新兰染色皆呈阴性。原代RGC中,α-SMA的表达很弱,随传代次数增加,α-SMA的表达量逐渐增高;Ⅱ型胶原的表达刚好和α-SMA相反,原代RGC表达最强,随着传代次数的增加,表达逐渐下降。

结论:成功建立大鼠肋生长板软骨细胞的体外培养模型。单层培养的RGC在第4代后逐渐失去分化表型,α-SMA可以作为RGC去分化的一个新的标志物。
血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)是机体一类重要的细胞群体,在血管通透性屏障、免疫防御及炎症反应中起着极其重要的作用[1,2]。能够合成并分泌多种活性因子,其中IL-6、ICAM-1 较有代表性,而IL-6 则被认为是内皮炎症反应的最佳标志分子[2]。越来越多的研究表明,内皮细胞作为LPS 作用的靶细胞,在LPS 引起的脓毒症、脓毒性休克、多器官功能衰竭等病理过程中起着关键的作用,目前认为血管内皮功能障碍及凋亡不仅是心脑血管疾病发生的共同环节,而且是败血症、休克、创伤等应激情况下发生MODS

更多 和ARDS 的重要原因。在ARDS 发生过程中,血管内皮细胞既是靶细胞也是效应细胞,它的损伤与激活是机体发生失控性炎症反应及高通透性肺水肿的根本环节[1]。糖皮质激素(glucocorticoid,GC)对ARDS 的抗炎作用必然会以血管内皮细胞作为一个主要靶点,但长期以来有关糖皮质激素治疗ARDS 的研究多以临床观察为主,而一些涉及到血管内皮的基础研究则主要探讨白细胞与血管内皮的粘附及对内皮的损伤,而涉及到糖皮质激素作用机制的研究则主要在受体水平进行。有关糖皮质激素治疗ARDS 时对血管内皮保护的机制,特别是受体前调节机制的研究目前尚未见报道。 本实验以内毒素脂多糖LPS(lipopolysaccharide,LPS)致伤体外培养的人脐静脉内皮细胞(human Sotrastaurin半抑制浓度 umbilical vein endothelial cell,HUVEC) , 然后观察糖皮质激素(Dexamethasone,Dex)对HUVEC 受伤前后不同时点表达IL-6、ICAM-1 等细胞因子的影响,及HUVEC 发生凋亡的情况,以确定其对血管内皮的炎性损伤是否具有保护作用。然后用RT-PCR

等方法观察人脐静脉内皮细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)、盐皮质激素受体(mineralocorticoid receptor,MR)及糖皮质激素受体前调节的关键酶11β-羟基类固醇脱氢酶(11-βhydroxysteroid dehydrogenase, 11β-HSD)基因的表达变化,并观察11β-HSD 的经典抑制剂甘草次酸(glycyrrhizic acid,GA)在其中的作用。力图阐明糖皮质激素保护血管内皮炎性损伤的受体前调节机制,探讨其在ARDS 治疗中的意义。 主要研究结果和结论如下: 一、不同浓度LPS 刺激人脐静脉内皮细胞,在刺激3h 开始时即可使HUVEC
背景和目的:病态窦房结综合征是临床常见疾病,对人类健康危害很大,有关其发病机制及防治措施的研究一直是心血管病研究领域的重要内容之一。本实验室在前期的研究中发现,缺血/再灌注(I/R)可引起在体及离体窦房结细胞结构和功能的改变,影响其电信号发放的节律和频率,导致电生理活动的紊乱。而心肌缺血预适应(IP)是迄今发现的最强大的机体内源性保护机制,普遍存在于正常动物及人的不同组织和器官,能有效对抗缺血及再灌注损伤所造成的多种心肌损害。但IP 的信号转导途径非常复杂,IP 的保护机制至今尚未阐明,有关IP 对窦房结的影响研究也十分有限。近期研究显示,KATP通道开放在IP 中具有重要作用,但不同类型KATP通道开放后的相关效应及其对IP 信号转导的影响仍存在诸多争议。细胞骨架也因其对信号转导的重要调节作用而逐渐被IP 研究所关注。研究表明,细胞骨架不仅调节着心肌细胞的电、机械活动,而且骨架结构的完整性对IP 效应的产生也具有重要影响。本研究将利用离体培养的乳鼠窦房结细胞,观察模拟IP 对细胞活性、离子稳态、骨架结构及离子通道的影响,探讨模拟IP 对乳鼠窦房结细胞的保护作用及机制;观察线粒体KATP通道在IP 中的作用,探讨KATP通道开放在IP 信号转导中的作用环节;观察细胞骨架结构改变对IP 效应的影响,探讨维持骨架结构完整性在IP 中的作用意义。为防治窦房结I/R 损伤提供理论依据和实验证据。 方法: 1.以Ⅱ型胶原酶为主消化分离乳鼠窦房结细胞,配合差速贴壁及Brdu 纯化培养。 2.

5%组细胞增殖抑制率均较含药血清30%组低(P<0.01),其余4组间无统计学差异；干预36h时,含药血清10%组,含药血清5%组,含药血清2.5%组细胞增殖抑制率均较含药血清20%组、含药血清30%组低(P<0.01),含药血清10%组,含药血清5%组,含药血清2.5%组三组间无统计学差异;干预48h时,含药血清10%组,含药血清5%组,含药血清2.5%组细胞增殖抑制率较含药血清30%组低(P<0.01～0.05),含药血清10%组,含药血清5%组,含药血清2.5%组三组间无统计学差异。给药浓度为30%含药血清时,干预48h,干预72h时各组细胞增殖抑制率较干预24h时明显增加(P<0.01),干预24h,干预72h时各组细胞增殖抑制率较干预36h时明显增加(P<0.01～0.05)；给药浓度为10%含药血清时,干预72h时各组细胞增殖抑制率较干预24h、干预36h时明显增加(P<0.05)；给药浓度为5%、2.5%含药血清时,各组无统计学差异。含药血清对细胞增殖的抑制率高低与浓度高低以及作用时间长短呈相关性。③划痕实验结果显示：空白血清组划痕间距较TGF-β1+空白血清组、TGF-β1+含药血清组均显著性增加(P
[目的]采用海人酸致痫SD大鼠模型,通过腹腔注射ALK5抑制剂(SB431542)干扰ALK5受体,观察癫痫大鼠海马组织中ALK1及其下游分子p-Smad1的mRNA及其蛋白的表达,研究癫痫大鼠ALK5对ALK1受体的作用,探讨可能的干预癫痫发作的新靶点。[方法]红藻氨酸(kainic

因为 acid, KA)侧脑室注入SD大鼠制备癫痫模型,随机分为KA模型对照组(A组)、ALK5 Inhibitor腹腔注射3d组(B组)、ALK5 Inhibitor腹腔注射7d组(C组),另设假手术组为生理盐水对照组(NC组),每组各10只。NC组、A组、B组分别于第3d,C组于第7d取海马,检测海马组织中ALK1和p-Smad1的mRNA及其蛋白的表达。[结果](1)免疫荧光组化结果显示：模型对照组ALK1和p-Smadl蛋白表达量较空白对照组表达增高(P0.05)。(2)荧光PCR结果显示：模型对照组ALK1和p-Smad1基因表达量较对照组表达增高(P0.05)。[结论](1)ALK5抑制剂腹腔注射后导致KA诱导的SD癫痫大鼠ALK1受体和p-Smad1表达下调。(2) TGF-β1—ALK5-p-Smad2/3对TGF-β1—ALK1-p-Smad1/5具有促进作用。
目的:探讨转化生长因子-β(TGF-β)Ⅰ型受体、Ⅱ型受体以及下游Smad蛋白在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型肾脏中表达及意义。 寻找更多 方法:90只雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组(CON组)、假手术组(SOR组)和单侧输尿管梗阻组(UUO组),分别于术后1d、3d、7d、14d、21d处死,观察各组大鼠肾功能变化;PAS染色观察大鼠肾间质病理形态改变;采用定时定量PCR基因芯片分析正常大鼠和不同分期肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-βⅠ,Ⅱ型受体亚型表达,观察其丰度变化,结合肾组织的病理改变,筛选出有病理生理意义的TGF-βⅠ,Ⅱ型受体亚型。进一步应用Real-time

PCR,Western blot,和免疫荧光检测筛选出的TGF-β受体亚型mRNA和蛋白在肾间质纤维化大鼠肾组织的分布和表达。 结果:随时间延长,UUO组大鼠的血肌酐,血尿素氮与CON组比较均于术后第7天出现升高,并随梗阻时间延长逐渐增加,于21天达到最高峰(P<0.01),在第21天有所回落。ALK-6蛋白表达呈进行性下降(P<0.05),于14天达到最低(P
目的:研究α-1,6岩藻糖基转移酶(α-1,6 fucosyltransferase,FUT8)在TGF-β1诱导的人近端肾小管上皮细胞(Human kidney-2 ,HK-2)—肌成纤维细胞转分化(epithelial to mesenchymal

transition, EMT)中的作用。 方法:将体外培养的HK-2细胞随机分为三组:①(CON组)对照组常规培养;②(TGF组):加入浓分别为(5、10、20、40)ng/ml的TGF-β1刺激细胞;③(TGFF组):使用siRNA干扰技术沉默细胞的FUT8基因,随后再加入20ng/ml TGF-β刺激细胞。前期工作中,我们合成了荧光素标记的FUT8-siRNA并瞬时转染HK-2细胞,使用倒置荧光显微镜检测siRNA的转染效率;PT-PCR及FUT8免疫荧光技术分别检测FUT8-siRNA基因沉默效果及蛋白抑制率。刺激细胞72小时后,观察各组细胞形态学改变;分别使用western blot及免疫荧光技术检测细胞总FUT8蛋白及其底物α-1,6岩藻糖链的表达情况;此外使用免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)结合凝集素印迹检测特异性结合在TGF-βI/II型受体ALK-5(type Pazopanib体内 I receptor activin-like kinase 5)及TGF-βRII(TGF-βtype II receptor)上的岩藻糖链的表达;使用免疫荧光技术共染FUT8、ALK5进一步验证两者的定位及表达;随后,使用western blot及免疫组化染色技术对P-smad2/3进行评估;而α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)也使用免疫组化染色进行评估。 结果: RT-PCR及western blot检测结果显示FUT8-siRNA在100nM浓度下成功干扰HK-2细胞中FUT8基因及蛋白水平的表达,且转染效率达90%。使用相差显微镜观察CON组细胞呈正常地上皮细胞铺路石样形态;TGF组细胞发生明显的形态学改变,可见细胞肥大、拉长,提示发生成纤维化改变;而TGFF组可以一定程度的抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞形态的改变。与CON组相比, TGF组FUT8总蛋白表达升高(P0.05);TGFF组与TGF组相比,FUT8蛋白(P<0.01)及其底物岩藻糖链(P<0.05)表达都降低。IP结合凝集素印迹显示特异性结合在TGF-βRII的岩藻糖链的表达情况,TGF组与CON组相比表达上调(P<0.05),而TGFF组与TGF组相比明显下调(P<0.05);而TGFF组与TGF组比较,FUT8-siRNA可以阻断其上调(P<0.05);同样,α-SMA免疫组化结果显示TGF-β1可剂量依赖性上调其表达(P<0.

乙酰肝素酶(heparanase,HPA)是目前发现的哺乳动物细胞中唯一能切割硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparansulfateproteoglycans,HSPGs)侧链的葡萄糖醛酸内切酶,参与细胞外基质的降解和重塑,是目前抗肿瘤转移的理想靶点。HPA也表现出非酶活性,如HPA的黏附作用促进肿瘤细胞获得转移能力、HPA介导核内组蛋白促进肿瘤侵袭转移等。该文就现阶段HPA在肿瘤细胞转移过程的非酶活性研究进展作一综述。
目的通过动态检测急性胰腺炎(AP)患者外周血清C反应蛋白(CRP)、脂肪酶(LPS)、白细胞介素(IL)1β和细胞间黏附分子(ICAM)1的水平及变化,评价多种指标联合检测在AP临床诊断中的价值。方法收集2010年1月-2012年12月在中国医科大学附属第四医院进行治疗的AP患者86例,其中重症急性胰腺炎(SAP)患者39例,轻症急性胰腺炎(MAP)患者47例。于入院第1、3、5、7天分别采集患者血清,另选取12例同期健康体检者作为对照。采用ELISA法检测血清中CRP、IL-1β和ICAM-1水平,干片速率法测定血清LPS的浓度。计量资料组间比较采用t检验,计数资料组间比较采用χ2检验。结果

这个 MAP组患者入院第1天的CRP、IL-1β和LPS水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(t值分别为-74.126、-60.135、-364.153,P值均<0.001);SAP组患者入院第1天的CRP、ICAM-1、IL-1β、LPS水平均明显高于对照组,差异亦有统计学意义(t值分别为-121.355、-25.728、-89.422、-415.840,P值均<0.001);各检测指标浓度的峰值出现在入院第1天或第3天,且随着治疗时间的延长,浓度呈进行性下降;与MAP患者相比,SAP患者血清中CRP、LPS、IL-1β和ICAM-1水平均较高,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论联合检测患者血清CRP、LPS、IL-1β和ICAM-1水平对于AP严重程度的早期判断具有一定的临床参考价值。
To date,more BVD-523化学结构 than 27,000 drugs are available to treat disease worldwide.The discovery of a new drug requires an average of 13 years of research and an investment of US$1.8 billion to bring a single drug

from the bench to a patient’s bedside(Figure1).Another approach,termed”new uses for old drugs”,”drug
NFAT5 plays a critical role in maintaining the renal functions. Its dis-regulation in the kidney leads to or is associated with certain renal diseases or disorders, most notably the urinary concentration defect. Hypertonicity, which the kidney medulla is normally exposed to, activates NFAT5 through phosphorylation of a signaling molecule or NFAT5 itself. Hypotonicity inhibits NFAT5 through a similar mechanism. More than a dozen of protein and lipid kinases have

been identified to contribute to tonicity-dependent regulation of NFAT5. Hypertonicity activates NFAT5 by increasing its nuclear localization and transactivating activity in the early phase and protein abundance in the late phase. The known mechanism 而且 for inhibition of NFAT5 by hypotonicity is a decrease of nuclear NFAT5. The present article reviews the effect of each kinase on NFAT5 nuclear localization, transactivation and protein abundance, and the relationship among these kinases, if known. Cyclosporine A and tacrolimus suppress immune reactions by inhibiting the phosphatase calcineurin-dependent activation of NFAT1. It is hoped that this review would stimulate the interest to seek explanations from the NFAT5 regulatory pathways for certain clinical presentations and to explore novel therapeutic approaches based on the pathways. On the basic science front, this review raises two interesting questions. The first one is how these kinases can specifically signal to NFAT5 in the context of hypertonicity or hypotonicity, because they also regulate other cellular activities and even opposite activities in some cases.

Methods:Immunohistochemical

staining with SP method was conducted to determine the expressions of GSK-3beta,Beta-catenin and PPAR-gamma in 48 cases of medulloblastoma and 10 normal cerebellar tissues. Results:The rate of abnormal expressions of beta-catenin and PPAR-gamma in MB was higher than that in normal. Conversely,GSK-3beta in MB was lower than that in the normal BGB324细胞系 (P

目的研究糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)抑制剂抗前列腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的效用。方法建立前列腺癌PC-3和LNCaP/Bcl-xL细胞株裸鼠移植瘤模型,观测GSK-3β抑制剂氯化锂(LiCl)及SB216763腹腔内给药后移植瘤重量及体积的变化。同时通过BrdU掺入的免疫组化染色探讨移植瘤的增殖状态,TUNEL染色比较对移植瘤细胞凋亡的影响。结果LiCl及SB216763均可明显抑制移植瘤生长(P<0.05)。与对照组相比,LiCl给药组细胞BrdU标记明显降低(P<0.05),TUNEL染色差异无统计学意义。结论抑制GSK-3β活性可抑制前列腺癌裸鼠移植瘤细胞在体内的生长,其中LiCl可能通过干扰癌细胞DNA复制发挥作用。
BACKGROUND: Previous studies have demonstrated that mutant amyloid precursor protein

(APP)or presenilin-1 (PS1) genes increase susceptibility to ischemic brain damage induced by middlecerebral artery occlusion. Possible mechanisms include over-production of beta-amyloid peptide(Aβ).OBJECTIVE: Because Aβ is over-produced SKI-606浓度 in the APP/PS1 double-transgenic mouse, the presentstudy focused on mechanisms of increased ischemic damage due to mutant APP and PS1 genes bymeasuring oxidative stress, mitochondrial function, and calcium homeostasis.DESIGN, TIME AND SETTING: The non-randomized, controlled, in vivo and in vitro

可能 experimentswere performed at the Medical Research Center, Second Clinical College, Jinan University betweenMay and October 2008.MATERIALS: Male APP transgenic mice carrying the mutant 695swe gene and female PS1transgenic mice carrying the mutant Leu235Pro gene were donated from the University of HongKong. SHSY5Y human neuroblastoma cells were purchased from ATCC (Manassas, VA, USA), andAβ_(1-42) was obtained from Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).METHODS: APP transgenic mice were mated with PS1 transgenic mice to produce APP/PS1double-transgenic mice and wildtype littermates mice. The photothrombotic stroke model wasinduced in six APP/PS1 double-transgenic and 6 wildtype littermates mice.

005);此外,p-AKT的阳性和肿瘤侵润深度不同的食管癌患者之间比较,有统计学上显著差异性(p = 0.008),并且p-AKT的阳性表达与预后差密切相关(p = 0.001)。 结论:ESCC中Shh、Gli1阳性表达与淋巴结转移相关,而p-AKT阳性表达则与肿瘤侵润深度相关,Shh、Gli1和p-AKT的阳性表达均与较差的预后相联系。在ESCC治疗策略上联合抑制Shh和PI3K/AKT通路可能更加有效。
研究背景 前列腺癌在美国是男性最常见恶性肿瘤之一,肿瘤死亡率位居第二。近年来,我国前列腺癌的检出率已呈明显上升趋势。目前,晚期雄激素非依赖型前列腺癌(AIPC)的治疗仍是一个难题,尚无理想的治疗方法。因此,研究和探索新的治疗策略,具有十分重要的临床意义。 研究表明,Hedgehog(Hh)信号通路的激活与前列腺癌密切相关。人前列腺癌组织表达Hh配体及其下游靶基因Gli。Hh信号通路抑制剂cyclopamine(环杷明)能抑制前列腺癌肿瘤细胞增殖、改变其侵袭能力、抑制移植肿瘤的生长并引起消退。但cyclopamine因含量少,合成困难,副作用大,限制了其临床应用。最近研究发现维生素D也是一种Hh信号通路抑制剂,以很高的亲和力结合Smo,抑制Gli活性,且作用强于cyclopamine。

前列腺癌的多药耐药(MDR)是导致其化疗失败的主要原因,肿瘤细胞MDR的发生与细胞膜上过量表达的ABC转运蛋白有关,包括P-型糖蛋白(PGP)、多药耐药蛋白(MRP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)等,它们可以将化疗药物泵出细胞外从而导致肿瘤细胞产生耐药性。研究表明,Hh通路抑制剂是一种有效的ABC转运蛋白抑制剂,特别是对PGP、BCRP具有很强的抑制作用。 然而,维生素D可引起高血钙的副作用影响了其在抗肿瘤领域的临床应用。EB1089是一种维生素D类似物,具有更强的调节肿瘤细胞生长、分化的作用,而对血钙的影响较小。本研究旨在探讨EB1089是否作为一种Hh通路抑制剂,通过Hh信号通路途径抑制雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞生长,逆转其MDR。 方法与结果 Venetoclax 首先采用MTT法和流式细胞技术检测EB1089对DU145细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,并与cyclopamine作比较,同时在光镜和电镜下观察细胞形态学和超微结构变化。结果显示,EB1089可以抑制DU145细胞的增殖,差异有统计学意义,呈时间和剂量依赖关系,且抑制作用强于cyclopamine。1、10、50、100nmol/L EB1089作用DU145细胞48h后,G0/G1期细胞逐渐增多,而S期细胞逐渐减少,细胞凋亡率逐步增高。EB1089作用后,镜下可见DU145细胞典型的凋亡形态学改变：细胞体积缩小,细胞核固缩、裂解,核碎片及凋亡小体形成。 因为 其次,分别用1、10、50、100nmol/L浓度的EB1089作用DU145细胞48h后,采用Real time-PCR和Western blot方法分别检测DU145细胞Glil、cyclinD1、BCL-2、Bax mRNA和蛋白的表达变化。结果显示,EB1089作用48h后,DU145细胞Glil、cyclinD1、Bcl-2 mRNA和蛋白表达均下降,Bax mRNA和蛋白表达均上调,并呈剂量依赖关系。 最后,MTT法检测EB1089和多西紫杉醇二者合用对DU145细胞增殖的作用,以及EB1089对耐多西紫杉醇DU145细胞(DU145-DR)化学敏感性的影响；并采用Real

time-PCR和Western blot方法分别检测EB1089作用后DU145-DR细胞PGP/MDR1、MRP、BCRP mRNA和蛋白的表达变化,结果显示,两药联合对DU145细胞增殖的抑制作用显著高于两药单独作用；DU145-DR细胞经EB1089作用后对多西紫杉醇的敏感性增加,逆转倍数为2.87,相对逆转效率为70.8%；EB1089作用后,DU145-DR细胞PGP/MDR1、BCRP的表达水平显著下调。

结论 EB1089可以抑制DU145细胞增殖,抑制作用于强于cyclopamine,EB1089可以阻滞DU145细胞于G1期,诱导DU145细胞凋亡,其作用机制可能是作为一种有效的Hh信号通路抑制剂,通过抑制Hh信号通路,下调Glil,进而调节cyclinD1、Bcl-2和Bax的表达来完成。EB 1089可以提高耐多西紫杉醇DU145细胞的化学敏感性,有效逆转其耐药性,其逆转机制可能主要通过下调PGP/MDR1、BCRP的表达来实现,EB1089与多西紫杉醇合用抑制DU145细胞增殖呈协同效应。
目的合成vismodegib(GDC-0449)。方法以2-氯-5-硝基苯胺、2-氨基吡啶和2-氯-4-甲磺酰基苯甲酸为起始原料,通过重氮化反应、硝基还原反应、吡啶-苯环碳-碳negishi偶联反应以及酰胺化反应得到目标产物。结果合成了vismodegib并经核磁共振氢谱和质谱确证结构;偶联反应收率61.5%,高于文献报道收率(60%)。结论本文优化了vismodegib的合成路线,同时改进了反应条件、简化了后处理,收率较高。
据《2012年中国肿瘤登记年报》数据显示,我国肺癌发病率70.4/10万,死亡率45.57/10万,占恶性肿瘤发病率和死亡率的首位,且有逐年上升趋势。小细胞肺癌虽占肺癌15%~20%,但由于肺癌患者基数大,小细胞肺癌(SCLC)患者人群也相当庞大,发病率11~14/10万,相当于我国食管癌的年总发病率,严重危害我国人民的健康。近十年,伴随靶向药物的临床应用,晚期非小细胞肺癌
目的表皮生长因子受体(Epithelial AC220半抑制浓度 growth factor receptor,EGFR)是酪氨酸激酶EGFR家族的一员,它可以促进细胞的增殖与分化等。在多种实体肿瘤如乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠癌、头颈部肿瘤、肾癌中存在EGFR基因的扩增或EGFR的高表达。靶向EGFR的小分子抑制剂目前在临床上应用广泛,但肿瘤耐药是其临床应用的主要障碍。Sonic hedgehog(SHH)信号通路主要调节了胚胎时期的细胞增殖、分化、组织发育及器官形成,其信号通路成员的突变或过表达往往会导致SHH信号通路的异常激活,从而导致肿瘤的发生及发展。本研究旨在对Sonic hedgehog信号通路…
h、Gli1、p-AKT和p-ERK的表达与临床病理特征及预后之间的关系。 方法:采用电话或信函随访的方式,了解食管癌患者术后生存的情况,使用统计学方法研究Shh、Gli1、p-AKT和p-ERK免疫组化表达在食管鳞癌中的分布特征,并和食管鳞癌临床特征诸如患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置、淋巴结转移、肿瘤侵润深度、癌分化程度、肿瘤TNM分期及术后生存期对比分析。 结果:Shh阳性表达在淋巴结转移阴性和淋巴结转移阳性的食管癌患者之间比较,有统计学上显著差异性(p = 0.027),且Shh的阳性表达与预后差密切相关(p = 0.017);Gli1阳性表达在淋巴结转移阴性和淋巴结转移阳性的食管癌患者之间比较,有统计学上显著差异性(p = 0.

5μmol/L姜黄素)和对照组(正常台氏液培养120min代替模拟I/R),采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用Western blot检测GSK-3、酪氨酸磷酸化GSK-3(pTyr-GSK-3)和丝氨酸磷酸化GSK-3(pSer-GSK-3)蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组H9c2细胞凋亡率明显提高(t=10.439,P=0.000),模型组pTyr-GSK-3和pSer-GSK-3表达均显著增加(t=5.208,P=0.006;t=5.854,P=0.004)。与模型组比较,姜黄素组凋亡率及pTyr-GSK-3表达水平显著降低(t=-8.325,P=0.001;t=-3.607,P=0.023),存活率及pSer-GSK-3表达水平显著升高(t=9.165,P=0.001;t=3.747,P=0.02)。结论

GSK-3的酪氨酸和丝氨酸磷酸化可能参与心肌细胞I/R损伤,姜黄素减少I/R心肌细胞凋亡可能与其通过减少酪氨酸磷酸化、增加丝氨酸磷酸化抑制GSK-3活性有关。
锂剂是Mg2+的竞争性抑制剂,具有抗躁狂、抗抑郁、抗自杀的临床效果。锂剂有众多的直接目标分子,其中,锂剂通过抑制糖原合成酶激酶-3(GSK-3)发挥稳定情绪、改善行为、促进神经生长等作用。已有多项研究报道GSK-3参与神经变性性疾病、脑血管性疾病、神经系统肿瘤等疾病的发生,本文就GSK-3、锂剂和神经精神性疾病作一综述。
LPS刺激巨噬细胞产生IFN-β在抵御外来病原微生物的免疫反应中发挥重要作用。本研究探讨新抗生素S632A3促进LPS诱导巨噬细胞产生IFN-β及其分子机制。采用实时定量PCR检测mRNA含量,ELISA检测细胞因子含量,激酶分析检测GSK-3β活性,Western Autophagy inhibitor制造商 blotting检测蛋白磷酸化水平。结果表明:S632A3可显著促进LPS诱导的巨噬细胞产生IFN-β,其分子机制是抑制细胞内GSK-3β活性,降低转录因子c-Jun苏氨酸239位点的磷酸化并增加c-Jun稳定性。结果提示,S632A3是一个新的抗炎先导化合物,通过抑制GSK-3β活性促进LPS诱导巨噬细胞产生IFN-β。
Irradiation from diverse sources is ubiquitous and closely associated with human activities. Radiation therapy (RT), an important component of multiple radiation origins, is a common therapeutic modality for cancer. More importantly, RT provides significant

contribution to oncotherapy by killing tumor cells. However, during the course of therapy, irradiation of normal tissues can

result in a wide range of side effects, including self-limited acute toxicities, mild chronic symptoms, or severe organ dysfunction. 那个 Although numerous promising radioprotective agents have emerged, only a few have successfully entered the market because of various limitations. At present, the widely accepted hypothesis for protection against radiation-caused injury involves the Wnt canonical pathway. Activating the Wnt/β-catenin signaling pathway may protect the salivary gland, 获悉更多 oral mucosa, and gastrointestinal epithelium from radiation damage. The underlying mechanisms include inhibiting apoptosis and preserving normal tissue functions. However, aberrant Wnt signaling underlies a wide range of pathologies in humans, and its various components contribute to cancer. Moreover, studies have suggested that Wnt/ β-catenin signaling may lead to radioresistance of cancer stem cell. These facts markedly complicate any definition of the exact function of the Wnt pathway.
目的探讨Tau蛋白调控Fyn信号通路在阿尔茨海默病(AD)大鼠发病中的作用机制。方法雄性SD大鼠60只随机分为正常组,模型组及观察组。采用β淀粉样蛋白毒性片段(Aβ25～35)海马注射制备AD大鼠模型。10μmol/L SB216763(Tau蛋白抑制剂)注射至观察组大鼠脑组织。采用SABC法对大鼠脑组织中Tau蛋白进行免疫组化检测,Western印迹检测Fyn和Fak的表达。结果与正常组相比,模型组大鼠脑组织Tau蛋白含量及Fyn和Fak的表达显著增加(P<0.

4、0.75、0.86μmol.L-1,其活性为阳性对照药的2.8～16.8倍。
目的:构建含有人磷脂酰肌醇3-激酶p110γ(phosphatidylinositol

3-kinase,catalytic subunit gamma,PI3KCG)基因的慢病毒载体,鉴定其在乳大鼠原代心肌细胞中的表达并作初步功能检测。方法:利用同源重组的方法构建含PI3KCG基因慢病毒载体质粒,测序鉴定后采用脂质体转染法同慢病毒系统三质粒共转染293T细胞,转染后24 h和48 h荧光显微镜下观察阳性对照组中的绿色荧光蛋白的表达,同时PCR法鉴定重组PI3KCG慢病毒质粒转染293T细胞成功,收集72 h病毒上清。培养乳大鼠原代心肌细胞,分为对照组,缺氧/复氧组,空载体阳性对照组,PI3KCG实验组,PI3KCG+Ly294002组5组,将含PI3KCG慢病毒载体的病毒液转染心肌细胞,检测各组的细胞培养上清中的乳酸脱氢酶浓度,观察预转染PI3KCG基因对心肌细胞缺氧/复氧过程中的保护作用。结果:成功构建含有PI3KCG基因的慢病毒载体质粒,并在293T细胞中成功表达。与缺氧/复氧组比较,PI3KCG组心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶水平明显降低(P<0.01);心肌细胞的存活率、搏动频率明显升高(P
表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)因其高效低毒等特点,广泛运用于非小细胞肺癌的治疗,临床发现部分患者在治疗初期就对EGFR-TKI不敏感,即发生EGFR-TKI原发性耐药。本文对EGFR-TKI原发性耐药机制进行综述,以期更有效地指导非小细胞肺癌个体化治疗。
分子靶向抗癌药物是指作用于肿瘤细胞的特定分子靶点,抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移等恶性生物行为,从而产生抗肿瘤作用的药物。PI3K(磷脂酰肌醇3-激酶)为一种由调节亚单位p85或p101和催化亚单位p110组成的脂激酶,通过激活下游的AKT等促进细胞生存、增殖和迁移等。由于PI3K在癌症发生中所起的关键作用,开发以PI3K为靶标的抑制剂引起制药界的高度重视。自2006年第一个新型PI3K抑制剂NVP-BEZ235开始临床试验以来,迄今已有近20个化合物进入临床试验阶段。本文首先简介PI3K的功能和分类,然后就PI3K抑制剂的研究进展以及与其它抗癌药物的联合用药做一综述。
乳腺癌是一类受激素受体调控且高度异质性的恶性肿瘤,不同类型乳腺癌无病生存期、复发转移率及预后均不相同。其中HER-2过表达型乳腺癌恶性程度高、生存率低,预后相对较差。但却是曲妥珠单抗进行分子靶向治疗的较好的适应症,可极大的改善该类患者的生存率。但由于药物耐药性、靶向效率低等,乳腺癌的最终复发不可避免。针对曲妥珠单抗耐药以后的后续治疗成为新的研究热点,本文介绍了HER-2过表达型乳腺癌发生的分子生物学基础及相应的信号传导过程,及以此为基础开发了一系列新药。
子宫内膜癌是女性生殖系统中最常见的一种恶性肿瘤,其发生和发展与多条信号通路的异常以及肿瘤相关基因的突变有关。磷脂肌醇3-激酶(phosphoinositide-3kinase,PI3K)-蛋白激酶B(protein

时间 selleck化学 SCH772984订购 kinase B,PKB,又称AKT)信号通路与Janus激酶(janus kinase,JAK)/信号转导及转录激活因子(signal transducer andactivator of transcription,STAT)信号通路是近几年来与子宫内膜癌发生相关信号通路研究的热点;大量的研究发现,它们的调节异常与子宫内膜的发生、发展、预后以及复发密切相关。除了肿瘤相关基因异常外,有研究认为肿瘤的发生不仅是异常细胞以及恶性克隆的产生,还与肿瘤的免疫逃逸(tumor immune escape)有关,其可使机体不能及时的清除异常组织,从而介导了肿瘤的发生、侵袭与转移。有研究发现,在肿瘤免疫逃逸过程中发挥重要作用的吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)与上述两条通路存在密切的关联,这可能正是肿瘤组织在机体中不仅能够稳定繁殖,还不易被机体免疫系统清除的关键所在。因此,本文旨在就上述两条信号通路与IDO相关性的研究作一综述。
目的:改进小分子磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂GDC-0941的合成工艺。方法:以3-氨基-2-噻吩甲酸甲酯为起始原料,经环合、氯代、取代、Suzuki偶联等9步反应制得磷脂酰肌醇-3-激酶抑制剂GDC-0941(2-(1H-吲唑-4-基)-6-[(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)甲基]-4-(吗啉-4-基)-噻吩并[3,2-d]嘧啶)。结果与结论:目标产物结构经1H-NMR和ESI-MS确证,总产率为33.2%(以3-氨基-2-噻吩甲酸甲酯计算)。改进后的制备工艺稳定实用、成本低廉,收率显著提高且适合于实验室研究的小规模制备。
目的:对XC505的抗肿瘤作用进行研究,为后续研究提供参考依据。方法:体内建立Colon26结肠癌小鼠肿瘤模型和A549人肺腺癌移植瘤模型,从而对XC505的抗肿瘤活性进行评价。结果:体内试验结果表明,XC505 30、60mg.kg-1剂量对小鼠Colon26结肠癌的抑瘤率分别为31.88%和76.12%;对A549人肺腺癌的抑瘤率分别为26.59%和56.

5μM汉黄芩素处理24h的抑制率为17.27%，当汉黄芩素浓度达到160μM时，对QG56的抑制率接近40.55%，分别用25、50、100和160μmol/L汉黄芩素处理24小时后三次实验测得各组抑制率分别为（20.51±1.32）%、（29.55±1.02）%、（32.56±0.51）%和（40.18±0.37）%，而24、48、72小时的半数抑制浓度（IC50值）分别为（63.45±7.02）μM、（52.60±8.09）和（38.37±7.82）μM。流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双标法检测证实了汉黄芩素能诱导QG56细胞凋亡,分别用25、50、100、160μmol/L汉黄芩素处理QG56细胞48小时后，凋亡率分别为20.79%、37.28%、50.88%和65.56%，当汉黄芩素浓度达到160μmol/L时，QG56细胞的最大凋亡率达到65.62%。倒置显微镜下观察，加药前，细胞贴壁良好，呈多边形，大小适中，核仁清晰，细胞连接成片，加药后细胞形态不规则、贴壁不佳、染色质浓缩、细胞突起消失。流式细胞术检测细胞凋亡：结果显示，细胞凋亡率随汉黄芩素浓度增加而增加，说明汉黄芩素可以明显诱导QG56细胞凋亡。荧光显微镜下观察，早期凋亡细胞呈绿色荧光，晚期凋亡呈红色荧光，Western

Angiogenesis抑制剂 blot检测磷酸化胞外信号调节激酶（p-ERK1/2）蛋白表达随药物浓度增大而明显下调，而阴性对照组P-ERK1/2蛋白水平无明显变化。表明汉黄芩素可以诱导肺癌细胞凋亡，RAF-MAPK-ERK可能是其作用的信号通路。 结论： （1）随着汉黄芩素浓度的增加，QG56细胞的生长抑制率明显升高，说明汉黄芩素具有抑制人肺癌QG56细胞生长增殖的作用。 （2）随着汉黄芩素浓度的增加，QG56细胞的凋亡率也明显增加，提示汉黄芩素具有诱导QG56细胞凋亡的作用。 （3）随着汉黄芩素浓度的增加p-ERK1/2的表达下降，提示其作用机制可能与抑制以p-ERK1/2为关键分子的信号传导通路有关，汉黄芩素有望作为新的抗癌药物应用于临床。
目的： 1.检测已经建立的非小细胞肺癌放射抗拒细胞系的放射敏感性。 2.初步探讨PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂LY294002和Rapamycin对大分割放疗的增敏作用。 方法： 1.体外培养A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞。3种细胞均接受射线照射,克隆形成实验检测照射后3种细胞增殖能力的差异；免疫荧光实验检测3种细胞放疗后24h残留的yH2AX焦点的差异。 2.体外培养A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞。实验分组：对照组(A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞)、LY294002组、Rapamycin组、LY294002+Rapamycin组,给予相应的射线照射。通过克隆形成实验检测加入抑制剂LY294002和／或Rapamycin后大分割放疗抗拒细胞放疗后的增殖能力；通过免疫荧光实验检测加入抑制剂LY294002和／或Rapamycin后大分割放疗抗拒细胞24h后的yH2AX焦点数。应用SPSS17.0统计分析软件包,实验数据以均数±标准差(x士S)表示,在检验数据正态分布及方差齐性的条件下,多组间数据比较采用方差分析,各组组间差异的比较用LSD—t检验。以P值<0.05),单抑制剂组与A549对照组相比未见明显差异,而双抑制剂组较A549组明显增加(P
实验目的：

并且 研究小檗碱抑制结肠癌HCT116细胞增殖与Wnt/β-catenin信号之间的关系及可能机制。 实验方法： 采用结晶紫染色、免疫荧光、流式细胞术、RT-PCR、Western blot、报告质粒等技术，研究小檗碱抑制HCT116细胞增殖与Wnt/β-catenin信号之间的关系及其可能的机制。具体方法如下： 1.分别采用结晶紫染色、免疫荧光、流式细胞术,检测小檗碱对结肠癌细胞HCT116增殖、凋亡和周期的影响。 2.利用荧光素酶报告质粒,检测小檗碱对HCT116细胞Wnt/β-catenin信号转导的影响。 3.通过Western blot检测，小檗碱对HCT116细胞总蛋白和胞浆/核蛋白中β-catenin蛋白水平以及Wnt下游目的基因表达的影响。

4.利用重组腺病毒技术，检测在过表达及沉默表达β-catenin的情况下，小檗碱对HCT116细胞增殖的影响。 5.采用LiCl抑制GSK3β，检测小檗碱对HCT116细胞增殖及细胞胞浆/核蛋白中β-catenin水平的影响。 6.采用RT-PCR方法，检测小檗碱对HCT116细胞β-catenin表达的影响。 实验结果： 1.小檗碱抑制HCT116细胞增殖，诱导其凋亡，并促使细胞发生G1期周期阻滞。 2.小檗碱抑制Wnt/β-catenin信号通路信号转导活性。 3.小檗碱降低HCT116细胞总蛋白和胞浆/核蛋白中β-catenin蛋白水平，以及下游目的基因的表达。 4.外源性过表达β-catenin减弱小檗碱对HCT116增殖的抑制作用，而沉默表达β-catenin能加强小檗碱对HCT116增殖的抑制作用。 5. GSK3β抑制剂LiCl不能逆转小檗碱对HCT116增殖的抑制作用以及胞浆/核蛋白中β-catenin蛋白水平的降低。 哪里 6.小檗碱明显抑制HCT116细胞中β-catenin mRNA表达。 实验结论： 小檗碱通过抑制HCT116细胞增殖、诱导凋亡和周期阻滞的作用与其抑制Wnt/β-catenin信号转导关系密切。其机制可能至少与小檗碱抑制HCT116细胞β-catenin mRNA表达有关。
目的：运用MALDI-TOF质谱技术平台检测横纹肌肉瘤中19个常见癌基因的突变位点与分布，并初步探讨其在横纹肌肉瘤发生发展中的意义。 方法：应用Sequenom MassArray技术结合OncoCarta突变试剂盒检测20例石蜡包埋横纹肌肉瘤（RMS）组织和2个细胞系(PLA802和RD)中19个常见癌基因238个突变位点的发生与分布，并分析其与RMS亚型、分级分期和生存状况的关系与意义；突变结果判读和数据统计学分析分别使用Typer4.0软件和SPSS17.0软件进行。 结果：（1）本组20例横纹肌肉瘤组织样本中5例（25%）检测到NRAS、KRAS和PIK3CA基因的突变，其中2例胚胎性RMS和1例腺泡状RMS均为NRAS_Q61K突变，而1例腺泡状RMS和1例多形性RMS样本中均检测到PIK3CA_Q546K突变，同时，在该例多形性RMS样本中还发现了KRAS_G12D突变的共同存在。（2）2例RMS细胞系中，1例胚胎性RMS检测到NRAS_Q61H突变，另1例腺泡状RMS则存在HRAS_Q61H和PIK3CA_E542K共突变。（3）RAS、PIK3CA或RAS/PIK3CA突变在不同分型、分级和分期的RMS之间无显著性差异（P>0.