05),且CCI组比HBO组降低显著(P<0.05)。CCI组、HBO组的磷酸化p38及P2X4受体含量较S组增加(P<0.05),且CCI组磷酸化p38及P2X4受体的表达比HBO组显著增加(P0.05),但与未给抑制剂第一部分实验的CCI组、HBO组比较明显增高(P<0.05);CCI组及HBO组的P2X4受体表达比S组显著增高(P0.05)。结论高压氧可能通过P2X4受体介导的p38

Ivacaftor细胞系 MAPK信号通路影响神经病理性疼痛大鼠。
目的分析胆酸降载脂蛋白A(Apo A)效应与miR-23b-3p的关系,研究胆酸降Apo A作用新机制。方法首先用生物信息学在线工具对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子肝细胞核因子4γ(HNF4γ)进行靶基因分析,使用荧光素酶报告系统对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子HNF4γ进行靶基因验证实验,Western blot检测Apo A表达水平、p38MAPK(MAPK:丝裂原活化蛋白激酶)及p-p38MAPK,实时定量PCR检测miR-23b-3p表达水平。结果生物信息学分析表明HNF4γ可作为miR-23b-3p的靶基因,荧光素酶报告系统转染miR-23b-3p处理组细胞裂解后荧光强度显著低于对照组,验证了HNF4γ可作为miR-23b-3p的靶基因。胆酸呈剂量和时间依赖性抑制Hep G2细胞Apo A的表达,以32 mg/L和24 h的作用最显著。胆酸抑制Apo A表达与活化MAPK和上调miR-23b-3p有关。结论胆酸呈剂量和时间依赖性地下调Hep G2细胞Apo A表达水平;胆酸降Apo A与上调miR-23b-3p有关。
分娩疼痛具有典型的内脏痛及躯体痛,电针分娩镇痛是一种安全有效、操作简单、对母婴无创伤的非药物治疗方法。在针灸镇痛领域,MAPKs是较为重要的研究对象。p38MAPK信号通路可被应激刺激激活,对疼痛发生、发展起着重要的作用,从基因水平及细胞分子学理论了解P38 selleckchem MAPK与分娩镇痛的关系,是研究电针分娩镇痛机制一个很好的侧重点,也为电针分娩镇痛的进一步研究提供科学依据和理论基础。
目的观察黄芩苷对宫颈癌HeLa细胞侵袭转移的作用及其相应机制。方法利用MTT法检测黄芩苷对HeLa细胞增殖的影响;Transwell小室法检测黄芩苷对HeLa细胞侵袭能力的影响;Real-time

PCR法检测黄芩苷对MMP-2、MMP-9RNA表达水平的影响;Western blot法检测黄芩苷对MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响;Western blot法检测黄芩苷对P38和p-P38蛋白表达的影响;Real-time PCR法检测黄芩苷和sb203580联合应用对MMP-2和MMP-9RNA表达水平的影响。结果黄芩苷能够有效抑制HeLa细胞的增值,当质量浓度超过60μg/mL时,与对照组相比(0μg/mL)差异出现统计学意义。在低于细胞增殖抑制浓度时,黄芩苷也能够有效抑制HeLa细胞的侵袭,10、20、40μg/mL组穿过基质胶到达小室底端的细胞数目分别为对照组的(97.58±17.78)%、(67.95±49.75)%和(32.35±20.41)%。黄芩苷能够有效抑制HeLa细胞中MMP-2和MMP-9的表达及有效抑制HeLa细胞中P38的磷酸化水平;P38信号通路抑制剂预处理,能够增强黄芩苷对MMP-2和MMP-9表达的抑制作用。结论黄芩苷能够有效抑制HeLa细胞的侵袭转移,这种作用可能与其通过调节P38信号通路的活性进一步调节MMP-2和MMP-9的表达有关。
目的研究血管紧张素Ⅱ(Ang

Ⅱ)对大鼠心脏成纤维细胞(CFs)转录因子Ets-1及其下游促纤维化因子表达和细胞增殖的调节及相关的分子机制。方法将原代培养的大鼠CFs分为对照组,Ang Ⅱ处理不同时间组以及不同剂量组,采用实时定量RT-PCR及western blotting实验技术检测Ang Ⅱ对Ets-1mRNA及蛋白表达的影响。用Ang Ⅱ受体拮抗剂、MAPKs、PKC及PTK抑制剂预处理CFs,测定其对Ang Ⅱ诱导的Ets-1、结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)表达及细胞增殖的影响。结果在CFs中,Ang Ⅱ可呈时间及浓度依赖性诱导Ets-1表达(P
目的探讨p38 BMS-777607 价格 MAPK对人主动脉平滑肌细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的影响。方法分别使用药理学抑制剂和siRNA干预细胞。药理学抑制剂试验细胞分为:1正常对照组,平滑肌细胞完全培养基正常培养;2 DMSO(p38 MAPK抑制剂溶剂)对照组,0.01%DMSO处理;3 p38 MAPK抑制剂组,0.01%p38 MAPK抑制剂(20 mg/m L)处理。基因沉默试验细胞分为:1静态对照组,平滑肌细胞完全培养基正常培养;2阴性对照siRNA组,M ACSfectin试剂转染阴性对照siRNA 48 h;3 p38 M APK siRNA组,M ACSfectin试剂转染p38 M APK siRNA 48 h。采用qRT-PCR法检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA表达;采用Western blotting法检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达以及p38 MAPK转染效率;荧光显微镜观察siRNA转染效率。结果与正常对照组相比,DMSO对照组细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达无明显变化(P>0.05),p38 MAPK抑制剂组细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达显著降低(P0.

adt治疗后促进前列腺癌上皮间质化(emt)及cd44+干/祖细胞数量增加。2.cd44+干/祖细胞通过TGFβ1-EMT信号通路促进前列腺癌的侵袭和转移。3.盐霉素通过靶向作用于前列腺癌CD44+干/祖细胞并有效抑制其增值从而达到抑制前列腺癌侵袭和转移的效果,或许可以成为治疗前列腺癌的新药。
胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)无限自我更新和广泛的分化潜能(多能性)得天独厚的特性,赋予了它在基础研究和再生医学领域的无可比拟的地位。精确操控ES细胞的命运——保留多能性(自我更新)或者践行多能性(谱系分化)是当今ES细胞研究领域的重点也是当务之急。由核心转录因子辐射的转录调控网络维持多能性是当今ES细胞多能性调节机制的主要成果。小分子化合物是一种非肽类的有机化合物,能够特异识别蛋白质高级结构,广泛用于癌细胞靶向治疗。将小分子化合物应用于ES细胞多能性调控研究产生了巨大的成功,甚至颠覆了传统对于ES细胞多能性维持机理的认识。作为一种新型的研究工具,小分子化合物调控ES细胞多能性的详细机制仍然研究不足。近些年有多个小分子化合物被报道均能促进ES细胞的多能性,但这些研究往往着眼于突出小分子化合物的个性化特点,对于不同小分子的共性特点缺乏关注。同时对于小分子处理对ES细胞广泛的生理影响,尚不能从中分辨对ES细胞多能性具有积极意义的生物功能。有研究显示小分子化合物往往具有多效性,所以局限于个体小分子无法判断其对ES细胞广泛的生理影响是否对于多能性维持都有积极意义。在这种情形下,我们推测如果重叠不同小分子化合物对ES细胞的共同影响,对于更全面阐释小分子化合物促进多能性的主效功能会有帮助,同时也可能发现影响ES细胞中影响多能性的其他内在机制。本研究首次横向比较了不同小分子化合物对ES细胞的生理影响,旨在发现不同小分子化合物影响ES细胞多能性状态“殊途同归”的共性功能。我们选择了四个小分子CHIR99021、PD0325901、SC1和SB431542处理小鼠J1

AZD8055数据表 因为 ES细胞,并进行了全基因组基因表达谱分析,基于芯片数据从多个维度进行了生物信息学分析并且进行了实验验证,主要发现如下:a.小分子化合物CHIR99021、PD0325901、SC1和SB431542通过上调多能性相关基因的表达和下调分化相关基因(主要为转录因子)表达的双重机制来促进ES细胞的多能性,这印证了ES细胞多能性状态是多能性维持基因和分化相关基因之间的活动平衡。b.参与组成质膜和胞外基质的蛋白和ES细胞多能性存在被低估的重要联系,膜蛋白的生化特性限制了相关研究,这可能是蛋白质组学技术突破后ES细胞领域一个新的制高点。支持这一结论的是近年科学家利用细胞培养材质的物理特性来促进体细胞重编程以及近来首次借助机械力导向重编程的报道。c.从代谢组学的角度来看,ES细胞的高水平糖酵解以及不饱和代谢产物(亚油酸等)的积累是ES细胞保持自我更新的重要因素,这也是不同小分子促进多能性的共享机制。最近的研究结果提示单纯从代谢角度切入探索,可能对ES细胞多能性维持产生新的理念。d.直接或间接抑制MAPK和TGF-beta信号通路是不同小分子促进多能性的共同目标,提示小鼠ES细胞内这两条通路是拮抗多能性的中坚力量,这也为设计信号通路靶向药物提供重要参考。e.重叠不同小分子调控的基因得到两组或促进或抑制多能性的候选基因,ESCAPE分析显示,大多数基因位于多能性调控网络。除了Nanog、Prdm14和Tcfcp2l1之外,其余基因在多能性维持的作用几乎没有报道,属于多能性调控网络中被遗失的重要基因。f.选取Lrrc34和Hesx1两个在ES细胞中功能未知的基因进行实验研究。结果显示两者通过不同机制促进ES细胞多能性。在我们研究过程中,Lrrc34被其他小组首次报道和ES细胞多能性有重要联系,这个事实更进一步也证明了我们的研究结论——不同小分子化合物在ES细胞中的交叠功能是有显著意义的。g.构建可诱导型表达Hesx1和靶向Hesx1的shRNA细胞株,我们证明了Hesx1促进多能性并且拮抗分化。其机制可能是激活核心转录因子Nanog的表达。h.LIF(白血病抑制因子)、CHIR99021、PD0325901通过不依赖彼此的信号转导途径激活Hesx1的表达。在ES细胞体外培养体系,Hesx1可以部分模拟LIF、CHIR99021和PD0325901的效果支持ES细胞自我更新。这印证了我们的猜想,处于多个小分子化合物下游靶标交集的基因具有重要的功能。本研究建立了一种发掘被忽略或遗失的重要基因的新方法,对于深入理解不同小分子化合物促进ES细胞多能性的共享机制提供了理论和实验基础,同时对于解析ES细胞多能性维持的多维度性具有启发意义。
背景:真核起始因子6(Eukaryotic

Selleck RGFP966 initiation factor 6,e IF6)是一种在进化过程中的保守蛋白,e IF6通过调控核糖体40S和60S亚基的结合在核糖体合成及翻译调控中发挥重要作用。研究发现:(1)细胞核内e IF6是酵母和哺乳动物细胞60S核糖体亚基生物合成必须的;(2)细胞浆内e IF6是哺乳动物细胞胰岛素和生长因子刺激蛋白质翻译所必须的。e IF6在体外的表达具有看家基因的特征,而其在体内的表达是可变的。此外,e IF6还在快速增殖的细胞的高表达。其表达异常已被证实与一些病理状态相关,比如结直肠癌、头颈部肿瘤、恶性间皮细胞瘤。有文献报道称e IF6高表达会引起非洲爪蟾眼睛发育畸变。e IF6被认为是翻译起始的限速因子,可影响肿瘤发生及肿瘤生长。胞浆中e IF6活性受损可限制淋巴瘤生成及肿瘤进展。本课题组前期研究发现e IF6是神经元蛋白3.1(neuronal protein 3.

01)。阿托伐他汀可以剂量依赖性地抑制IL-1β所致的大鼠VSMC迁移。1μmol／L和10μmol／L阿托伐他汀组细胞迁移数较IL-1β组分别减少22.22％和55.56％，均P＜0.01。0.1μmol／L阿托伐他汀组(25±4)与IL-1β组相比无显著性差异(P＞0.05)。与IL-1β组相比E64d组(10±2)细胞迁移数也明显减少，P＜0.01。 2、阿托伐他汀可以呈剂量依赖性地抑制IL-1β所致的大鼠VSMC中Cat S mRNA表达。与IL-1β组(0.88±0.08)相比，1μmol／L和10μmol／L阿托伐他汀组使Cat S表达分别下降19.32％和56.81％，两两比较均P＜0.01。0.1μmol／L阿托伐他汀组Cat S mRNA表达(0.84±0.07)与IL-1β组相比无显著性差异(P＞0.05)。 3、与IL-1β组(18.94±1.50)相比，1μmol／L和10μmol／L阿托伐他汀组Cat S免疫细胞化学评分分别为15.56±1.13和9.72±0.78，两两比较均P＜0.01。0.1μmol／L阿托伐他汀组(18.35±1.36)与IL-1β组相比无显著性差异(P＞0.05)。

AZD2281供应商 一般 4、与正常对照组(1.04±0.01)相比，IL-1β使大鼠VSMC中NF-κB表达(18.85±1.46)明显增加。与IL-1β组相比，1μmol／L和10μmol／L阿托伐他汀组NF-κB评分分别为15.37±1.15和9.58±0.80(两两比较均P＜0.01)，呈明显剂量依赖性。0.1μmol／L阿托伐他汀组NF-κB表达(18.20±1.53)与IL-1β组无显著性差异(P＞0.05)。 结论 组织蛋白酶在IL-1β引起的大鼠VSMC迁移中起重要作用，阿托伐他汀可以剂量依赖性地抑制IL-1β引起的大鼠VSMC迁移。阿托伐他汀可以剂量依赖性地抑制IL-1β引起的大鼠VSMC中NF-κB和Cat

S表达。阿托伐他汀可能通过抑制NF-κB使Cat S表达减少，从而抑制VSMC迁移。 背景 经皮腔内冠状动脉血管成形术是冠心病治疗的一种重要方法，但是，部分病人在术后6个月出现血管内再狭窄，严重影响了该手术方式的远期疗效。新生内膜形成在再狭窄的发生中起着重要作用，VSMC从中膜向内膜迁移是新生内膜形成的一个主要原因。Cat S能降解ECM的多种成分，促进VSMC迁移，与新生内膜的形成密切相关。阿托伐他汀有明显抑制新生内膜形成的作用，但是其机制仍需进一步研究。阿托伐他汀能否通过抑制Cat

S表达减轻新生内膜形成目前尚不清楚。 目的 观察阿托伐他汀对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜形成和NF-κB及Cat S表达的影响，探讨阿托伐他汀减轻血管球囊损伤后新生内膜形成的机制。 可能 方法 32只雄性SD大鼠，随机分为正常对照组、假手术组、手术组和阿托伐他汀组，每组8只，均予普通饮食。假手术组左侧颈动脉送入球囊但不行球囊损伤。手术组和阿托伐他汀组行左侧颈动脉球囊损伤，阿托伐他汀组在术后予阿托伐他汀10mg·kg~(-1)·d~(-1)。各组术前、术后1天和术后28天采血用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定血清IL-1β变化。动物喂养28天后处死取左侧颈动脉行病理形态学检测，用免疫组化法检测NF-κB表达，用RT-PCR和免疫组化法测定Cat S表达。 结果 1、四组术前、术后1天和术后28天血清IL-1β水平均无显著性差异。 2、与正常对照组和假手术组相比，手术组内膜面积[(148.62±8.84)×10~3μm~2]和内膜／中膜面积(I／M)比值(2.06±0.15)均明显增加，P＜0.01。阿托伐他汀组内膜面积[(64.75±5.12)×10~3μm~2]和I／M比值(0.90±0.05)与手术组相比均明显减少，P＜0.01。四组中膜面积无显著性差异(P＞0.05)。 3、正常对照组和假手术组基本无Cat S mRNA表达，手术组Cat S mRNA表达(0.83±0.07)明显增加，P＜0.01。与手术组相比，阿托伐他汀组Cat S mRNA表达(0.48±0.04)明显减少，P＜0.01。 4、正常对照组和假手术组无明显Cat S阳性表达，手术组和阿托伐他汀组内膜Cat S阳性表达明显增加。与手术组(15.28±51.42)相比，阿托伐他汀组Cat S免疫组化评分(8.50±0.73)明显减少，P＜0.01。 5、正常对照组和假手术组无明显NF-κB阳性表达，手术组和阿托伐他汀组内膜NF-κB阳性表达明显增加。与手术组(12.45±1.30)相比，阿托伐他汀组NF-κB免疫组化评分(6.74±0.54)明显减少，P＜0.01。 6、内膜面积分别与Cat S mRNA表达、Cat S及NF-κB免疫组化评分呈显著的正相关(r=0.58，0.56和0.53，均为P＜0.

028)；血管内皮生长因子A在两组的相对表达量分别为0.6904±0.1032和0.7411±0.1007,两组血管内皮生长因子A的表达量无显著性差异(t=-0.786,P=0.454)。结膜下注射50μmol/L SB203580能抑制磷酸化p38表达；而对血管内皮生长因子A的表达无明显影响。 4.病理学及免疫组织化学染色结果术后7d,50μmol/L SB203580组角膜各层排列整齐,新生血管管腔细小、密度低,炎性细胞浸润少, CD31染色结果：强表达于新生血管管腔内皮细胞,排列尚规整,角膜内皮细胞弱表达；而生理盐水组角膜大量血管样结构,管腔较大、较多,炎性细胞浸润多且分布无规则,进一步CD31染色：大量阳性细胞分布于新生血管,排列杂乱,部分炎性浸润细胞亦有较强表达。

结论 1.结膜下注射50μmol/L SB203580显著抑制大鼠角膜新生血管生长。 2.结膜下注射50μmol/L SB203580抑制磷酸化p38的表达,即抑制p38的激活；而对大鼠角膜VEGFA的表达无显著影响。 3.SB203580抑制炎症反应,抑制炎性细胞在角膜的浸润。 4.进一步证实p38信号转导通路和大鼠角膜新生血管调控相关。 5.靶向p38阻断可能是角膜新生血管治疗的新策略。 第四部分可溶性血管内皮生长因子受体2对血管化大鼠角膜磷酸化p38表达的影响 目的 采用可溶性血管内皮生长因子受体2阻断血管内皮生长因子与其受体的结合,研究其是否能抑制大鼠角膜新生血管生长,并进一步探讨其是否参与p38信号转导通路的激活,最终分析p38信号转导通路参与调控角膜新生血管是否与血管内皮生长因子途径相关。 方法 1.建立大鼠角膜新生血管模型采用缝线法建立SD大鼠右眼角膜新生血管模型,将缝线后的大鼠随机分为两组：可溶性血管内皮生长因子受体2结膜下注射组和生理盐水结膜下注射组,每组8只。 A 1210477 2.结膜下注射依据分组从术后第1日开始用药,分别结膜下注射不同药物,每日1次,共7d。 3.临床观察每日在显微镜下观察角膜缝线后角膜透明度、上皮完整性、缝线数量以及是否存在角膜感染,并重点观察角膜新生血管情况。 4.计算后缝线后7d两组角膜新生血管面积显微镜下测量角膜新生血管的长度并计算角膜新生血管面积。 5.Western Blot检测两组大鼠角膜p38和磷酸化p38的表达缝线后7d,各组分别随机选取5只,摘取角膜,收集角膜蛋白,采用Western Blot方法检测各组角膜p38和磷酸化p38的表达。 6.病理学及免疫荧光检查各组随机选取3只角膜,常规多聚甲醛固定,行病理学检查；修复抗原后行免疫荧光检测p38和磷酸化p38的分布。

7.统计学分析采用SPSS13.0软件分析,计量资料以均数±标准差表示,组间比较采用T检验,所有统计推断均采用双侧检验,检验水准a=0.05。 结果 1.动物观察生理盐水对照组,在观察过程中,睫状充血明显,新生血管管腔较粗且生长较快,缝线后7日,大量密集网状新生血管跨越角膜缝线处。而可溶性血管内皮生长因子受体2组在观察 没有 2.角膜新生血管面积结果可溶性血管内皮生长因子受体2结膜下注射组和生理盐水注射组大鼠角膜新生血管面积分别为3.87±0.73和6.94±0.92mm2,可溶性血管内皮生长因子受体2结膜下注射组显著低于生理盐水结膜下注射组(t=-7.343,P=0.000)。 3.Western Blot结果可溶性血管内皮生长因子受体2结膜下注射组和生理盐水组大鼠角膜p38的相对表达量分别为0.6179±0.1334和0.6038±0.1484,两组p38表达无显著性差异(t=0.158,P=0.878)；两组磷酸化p38的相对表达量分别为0.2667±0.0642和0.4771±0.1171,可溶性血管内皮生长因子受体2结膜下注射组显著低于生理盐水注射组(t=-3.523,P=0.008)。结膜下注射可溶性血管内皮生长因子受体2抑制p38激活。

4.病理学和免疫荧光检查结果术后7d,可溶性血管内皮生长因子受体2结膜下注射组角膜各层排列整齐,新生血管管腔细小、密度低；而生理盐水组角膜见大量血管样结构,管腔较大、较多,炎性细胞浸润杂乱。两组p38免疫荧光检测分布基本一致,多位于细胞浆；而磷酸化p38强表达在生理盐水组,定位均在细胞核内。 点击此处 结论 1.结膜下注射可溶性血管内皮生长因子受体2抑制大鼠角膜新生血管生长。 2.结膜下注射可溶性血管内皮生长因子受体2抑制大鼠角膜血管化进程中p38信号转导通路的激活,下调磷酸化p38的表达。 3.p38与血管内皮生长因子所介导的信号转导过程既互相联系、偶有协同,又相对独立、各自作用；在纷繁复杂的细胞信号转导网络中,二者可能不是简单的线性排列关系。
目的：炎症因子白介素6（IL-6）在包括糖尿病视网膜病、葡萄膜炎等多种眼科炎症性疾病中起重要作用，可能成为下一个潜在的治疗靶点。视网膜Müller细胞是眼内贯穿视网膜全层的重要细胞，是各种炎症因子分泌的主要来源，对眼内炎症的调节起到了重要作用。然而，视网膜Müller细胞IL-6的表达及其调控机制尚未清楚。本实验目的在于借助于视网膜Müller细胞系（MIO-M1）细胞，深入研究并阐述视网膜Müller细胞IL-6的表达及其调控机制。 方法：为找到引起视网膜Müller细胞IL-6表达的最强潜在因素，本实验用不同的刺激：IL-1β（10ng/mL），TNF-α（10ng/mL），IL-6（10ng/mL），IL-8（10ng/mL），VEGF（10ng/mL），IFN-γ（10ng/mL），Glucose（50mM），Mannitol（50mM）处理MIO-M1细胞24h，Western Blot技术检测MIO-M1细胞内IL-6的蛋白改变。 为进一步明确IL-1β对视网膜Müller细胞在mNRA水平和蛋白水平对IL-6的调控作用，不同浓度的IL-1β （0,0.1,1,10ng/mL）刺激MIO-M1细胞24h或者IL-1β（10ng/mL）刺激MIO-M1细胞不同时间（0,2,6,12,24h），随后分别用Western Blot技术检测细胞内IL-6的mRNA和IL-6蛋白表达改变。不同浓度的IL-6（0,0.

01）；KM＋LA组小鼠ABR阈移虽然在用药后也有增大，但较KM组明显减小（P＜0.01）。

2．对照组耳蜗外毛细胞、螺旋神经节及血管纹中均可见p-p38MAPK和p-JNK表达，其阳性免疫反应产物呈棕黄色，分布于胞浆及胞核内。KM组、KM＋LA组和LA组小鼠耳蜗中p-p38MAPK和p-JNK阳性反应产物的分布与对照组大致相同，但KM组的阳性染色比对照组明显加深；而KM＋LA组的阳性染色则较KM组明显减弱。显微图像分析结果显示，KM组小鼠耳蜗p-p38MAPK和p-JNK表达较对照组明显增强（P＜0.01）；而KM＋LA组小鼠耳蜗p-p38MAPK和p-JNK的表达则明显弱于KM组（P＜0.01）。 3．蛋白质印迹检测结果显示，对照组小鼠耳蜗p-p38MAPK和p-JNK的电泳条带较弱，而KM组小鼠耳蜗p-p38MAPK和p-JNK的电泳条带均明显强于对照组，KM＋LA组小鼠耳蜗p-p38MAPK和p-JNK的电泳条带则较KM组明显减弱。半定量分析结果显示，KM组小鼠耳蜗p-p38MAPK和p-JNK的蛋白表达水平均较对照组明显增高（P＜0.01）；而KM＋LA组小鼠耳蜗p-p38MAPK/β-actin比值和p-JNK/β-actin比值则均较KM组明显减小，即p-p38MAPK和p-JNK的蛋白表达水平表达较KM组明显降低。 也许 结论 p38MAPK和JNK介导了KM对BALB/c小鼠的耳毒性损伤，LA可通过显著抑制KM所致p-p38MAPK和p-JNK的高表达，从而有效防护KM的耳毒性，这可能是LA发挥防护作用的机制之一。
减数分裂是遗传学的基础,它保证了有性生殖生物个体世代之间染色体数目的稳定性,为有性生殖过程中创造变异提供了遗传的物质基础。小鼠卵母细胞的减数分裂是极端的不对称分裂,分裂过程中排出非常小的不具有生物学功能的极体和含有大部分母源物质的卵细胞,为后期的受精和早期胚胎发育做准备。 丝氨酸/苏氨酸相似激酶(ste-20like kinase)是在进化上是非常保守的微管相关蛋白,并且是Rho-GTPase Cdc42/Rac主要的下游靶蛋白,参与许多重要细胞活动,例如细胞迁移,细胞骨架重组以及诱导细胞凋亡和影响细胞周期进程等,是细胞有丝分裂所必需的。 首先,本文针对SLK在小鼠卵母细胞减数分裂过程中四个典型时期GV期,GVBD期,MI期,MII期,即培养小鼠卵母细胞Oh,2h,8h和16h的RNA水平表达量进行研究,通过RT-PCR的方法检测。验证了SLK在各个时期的RNA水平表达量很高,并且随着减数分裂进程的推进,逐渐增加。

这个 其次,主要针对SLK在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的表达和定位进行了研究。检测了小鼠卵母细胞体外培养的Oh,2h,8h和16h,即相应的小鼠卵母细胞成熟的GV期,GVBD期,MI期,MII期SLK的表达和定位情况。证实了SLK在小鼠卵母细胞减数分裂过程中各时期表达均衡全过程。通过免疫荧光染色方法,发现SLK特异性地定位于减数分裂各期的染色体着丝粒上。 同时,通过NOCO对卵母细胞进行处理后,利用染色体扩展方法对SLK在卵母细胞染色体上的定位与表达进行了研究。实验显示在小鼠卵母细胞减数分裂过程MI和MII时期,经过NOCO处理,SLK的定位和表达明显强于对照组,实验结果说明经过NOCO处理将微管蛋白和染体色着丝粒之间的连接破坏之后,SLK的表达明显增强。该结果显示SLK与微管相关。对于纺锤体与染色体连接是非常重要的。

然后,主要针对SLK与Crest在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的定位关系进行了研究。本文中采用染色体扩展的试验方法对二者进行了研究。实验显示,SLK在小鼠卵母细胞减数分裂全程都有定位,在Pro-MI,MI和MII主要定位在染色体着丝粒上,并且SLK与Crest共染实验显示二者共定位于染色体着丝粒上。实验结果说明SLK与检验点蛋白相关,为了研究SLK与检验点蛋白有着怎样的关系,我们设计了下一个实验进行进一步研究。 为了验证SLK与检验点蛋白的相互关系,本文对SLK与Mad1在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的定位关关系进行了研究。使用染色体扩展的试验方法对二者的定位进行了研究,实验结果显示SLK和Mad1在小鼠卵母细胞Pro-MI期共定位于染色体的着丝粒上。但是,在卵母细胞分裂中期(MI),MAD1离开着丝粒,同时SLK依然存在于着丝粒上。当NOCO处理以后Mad1在分裂后期又回到着丝粒上与SLK相重合。实验结果说明SLK与检验点蛋白Mad1有着密切的关系。 最后,为了研究SLK在小鼠卵母细胞中的功能,利用显微注射方法对小鼠卵母细胞注射Si-RNA和Morphlinor,对SLK进行敲降,来观察研究SLK对于减数分裂进程的影响,实验结果显示,SLK对小鼠卵母细胞减数分裂进程时间以及成熟率影响不显著。 购买BVD-523 通过以上研究表明,SLK对于小鼠卵母细胞减数分裂过程是十分重要的。因此对于SLK的研究同时也是十分必要的。本文中就针对SLK小鼠卵母细胞减数分裂进程中进行了详细的研究。
目的：建立哮喘小鼠模型并观察小鼠气道炎症及气道黏液分泌的情况。 方法：清洁级BALB/c雄性小鼠20只随机分为两组：生理盐水对照组(NS组)和哮喘组(AS组),各10只。AS组于第1、13天腹腔注射卵清白蛋白(OVA)致敏,第19天开始雾化吸入5%OVA溶液30min,连续激发5天,制备哮喘小鼠模型,NS组以生理盐水代替OVA,处理方法同AS组。测定各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数和白细胞分类计数,以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中IL-5和IL-32水平,阿尔辛蓝—过碘酸雪夫(AB-PAS)染色观察气道杯状细胞及气道分泌黏液,HE染色和VG染色观察肺组织病理学改变,RT-PCR、免疫组织化学(IHC)及免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中黏蛋白Muc5ac mRNA及蛋白水平的表达。 结果：AS组小鼠BALF中的细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞及中性粒细胞计数、IL-5和IL-32水平、肺组织AB-PAS阳染面积、Muc5ac mRNA和蛋白表达均高于NS组,差异均有统计学意义(均P0.05)；地塞米松和U0126可以抑制ERK1/2的磷酸化,且二者差异无统计学意义；各组小鼠Muc5ac mRNA和蛋白表达与ERK1/2的磷酸化水平呈高度正相关(r值分别为0.983、0.

5d的Osx(-/-)小鼠胚胎中无矿化反应,完全丧失骨形成能力;新生的Osx(-/-)小鼠因矿化缺失,呼吸困难,出生后15min内即死去。这些研究说明Osx是成骨细胞分化和骨发育不可缺少的调节因子。2002年,Nakashima等研究发现Osx在牙胚的间叶细胞中有阳性信号显示;2006年Kumamoto Dabrafenib化学结构 H等研究也发现Osx mRNA在牙胚、造釉细胞瘤牙源性组织中均有阳性表达。这些表明Osx可能在牙齿、牙周组织的发育中具有重要的作用。Osx作为成骨细胞分化的关键因子,与骨发育和牙齿发育关系的研究正在不断开展。但Osx在正畸牙齿移动牙周组织的表达和分布,机械力作用下在体外培养的人牙周膜细胞中的表达变化情况,以及在人牙周膜细胞受力后向成骨样细胞分化的过程中所起的作用,国内外尚未有报道。 本研究通过建立大鼠正畸牙齿移动的动物模型和体外培养人牙周膜细胞,结合体内外加力实验技术和质粒转染等分子生物学技术,拟从组织、细胞水平以及分子生物学角度探讨Osx在正畸牙齿移动过程中对牙周组织改建的影响及作用机制,以期为进一步系统性研究正畸力作用下牙周组织骨改建的分子生物学机制开辟一条新途径。

方法 1.观察大鼠正畸牙周组织改建过程中Osx的表达变化 以大鼠上颌右侧第一磨牙为实验牙,采用拉簧加力法建立正畸牙齿移动的动物模型。在加力0h、1h、2h、4h、8h、12h、1d、3d、5d、7d和14d后,处死大鼠,固定,脱钙,制作大鼠第一磨牙牙周组织石蜡切片,采用HE染色观察牙周组织形态学变化,并采用免疫组化方法半定量分析Osx在牙周组织的表达变化。

2.观察机械力加载下人牙周膜细胞Osx mRNA和蛋白的表达变化 采用组织块法培养原代人牙周膜细胞,并做波形丝蛋白抗体和角蛋白抗体染色鉴定。取生长状态良好的第2-3代人牙周膜细胞,按2.5×10~5个/孔接种于6孔细胞培养板培养。待细胞融合80%,换用含2%FBS的条件培养液继续培养24h。后将六孔板置于37℃离心机加力支架中,实验组以离心机加力(631rpm,约80g相对离心力),加力时间分别为1h、2h、4h、6h、8h和12h。加力结束后,采用Real-time RT-PCR和Western blot方法分别观察Osx mRNA和蛋白表达情况;同时,采用细胞免疫荧光技术检测Osx蛋白绿色荧光在细胞内的表达定位,并统计分析Osx蛋白阳性表达的细胞数量及其核内阳性表达的细胞比例。 3.观察Osx过表达对人牙周膜细胞骨向分化的影响 取生长状态良好的第2-3代人牙周膜细胞,按2.5×10~5个/孔接种于6孔细胞培养板培养。待细胞融合80%,按阳离子脂质体Lipofeetamine ~(TM)2000说明操作,用获赠的重组质粒pcDNA3.1 flag-Osx和空载体质粒pcDNA3.1 flag转染人牙周膜细胞。采用Real-time RT-PCR和Western blot方法检测未转染、转染空质粒(pcDNA3.1 flag)、转染目的基因(pcDNA3.1 flag-Osx)三组细胞Osx mRNA和蛋白表达水平;应用试剂盒检测三组细胞碱性磷酸酶(alkaline Selleck BGB324 phosphatase,ALP)活性变化;并采用RT-PCR技术观察Cbfal及相关成骨标志基因(ALP、OPN、OC、BSP和ColⅠ)的mRNA表达情况。三组细胞均加载6h离心力(631rpm)后,再次观察三组细胞的上述检测指标变化。 4.观察人重组骨形成蛋白2(rhBMP-2)作用下人牙周膜细胞Osx的表达 取生长状态良好的第3代细胞,以1×10~5个/孔的密度接种于6孔细胞培养板中。孵育24小时后,加入含rhBMP-2的培养液进行培养。实验分组1)按照不同的浓度分组:实验组用含10%FBS和浓度分别为50、100、150、200、250、300、400、600ng/ml rhBMP-2的DMEM培养液培养,诱导7d。每种浓度加6孔。2)按培养时间分组:实验组用含10%FBS和浓度为200ng/ml的rhBMP-2的培养液分别培养2d、3d、5d、7d、10d、14d和21d。每组加6孔。两对照组细胞均用含10%FBS的DMEM培养液培养。培养结束后,采用Real-time

Alectinib核磁共振 RT-PCR和Western blot方法检测各组细胞Osx mRNA和蛋白表达水平。 结果 1.大鼠正畸牙周组织改建过程中Osx的表达变化 在正常对照组,Osx在牙周膜呈弱阳性表达,分布较均匀,在靠近牙骨质侧牙周膜部分着色相对较重。正畸加力后大鼠牙周组织中Osx表达增强,表达贯穿正畸牙周组织改建的全过程。加力1d时,在压力区和张力区牙周膜Osx阳性着色均已显著增强,着色分布较均匀,且两侧着色强度无明显差异。随着加力时间的延长,Osx着色分布发生一定的改变。在张力区,靠近牙骨质和牙槽骨表面的牙周膜区域强阳性表达;在压力区,靠近牙骨质表面的牙周膜强阳性表达,而在发生明显骨吸收的牙槽骨侧无明显着色,而且张力区整体上比压力区阳性染色深,新骨形成区域阳性染色较强。 2.机械力作用下人牙周膜细胞Osx mRNA和蛋白的表达变化 Osx mRNA在正常人牙周膜细胞中的表达极其微弱。在机械力加载下,OsxmRNA的表达发生了一系列变化:细胞加力1h、2h时,Osx mRNA的表达略升高,但无统计学意义;加力4h时,表达开始明显增强(P＜0.01);随后快速增加至8h,表达显著增强(P＜0.01);后表达缓慢增加,持续到12h加力结束。 Osx蛋白在正常人牙周膜细胞中未见表达。细胞加载80g离心力1h、2h时,仍未检测到Osx蛋白表达(P＞0.05);加力4h时,呈现弱表达(P＜0.05);6h、8h时,表达逐渐增加(P＜0.01);12h时,表达显著增强,达到最高水平。变化具有时间依从性。 免疫荧光检测结果显示:正常的人牙周膜细胞内无绿色荧光显现;加力1h、2h的细胞内仍未检测到Osx阳性表达产物;加力4h后,少量细胞的细胞质内开始呈现微弱的绿色荧光(P＜0.01);加力8h时,约40%-50%的细胞发出明显的绿色荧光,细胞质、细胞核内均有阳性表达产物;加力12h时,大部分细胞(约87%)呈现强阳性表达,且主要集中在细胞核内。 3.Osx过表达对人牙周膜细胞骨向分化的影响 转染24h后,转染目的基因pcDNA3.

05~0.01），且APN10组、APN20组、APN30组三组间细胞凋亡率逐渐增加（P＜0.05)。 (3)Western-blot结果显示：与APN0组比较，APN20组、APN30组p-p38MAPK以及Caspase-3蛋白表达均显著增高(P<0.01)；与APN20组相比，APN30组p-p38MAPK以及Caspase-3蛋白表达显著增高(P<0.05)；与APN30组相比，APN30+SB组p-p38MAPK以及Caspase-3蛋白表达显著降低(P
目的： 通过组织块法培养人牙龈成纤维细胞(1uman gingival fibroblast, HGFs),观察HGFs体外培养的生物学特性,探讨人类β-防御素3(Human Beta-Defensins3, hBD3)对HGFs增殖情况的影响,通过分析hBD3及与Pg-LPS联合作用对HGFs分泌PGE2和MMP-1的情况,初步探讨此过程中可能涉及到的TLR, MAPK, PI3K, NF-κB各级信号通路。研究hBD3在牙周炎致病机制方面的作用。 方法： 1.组织块培养法体外培养人牙龈成纤维细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫组织化学方法鉴定细胞来源,3-6代细胞用于实验。 有 2.四甲基偶氮唑盐比色法(methyl thiazolyl terazolium, MTT)动态检测人牙龈成纤维细胞在不同浓度hBD3干预下增殖情况。

3.酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assays, ELISA)检测不同浓度hBD3不同时间点HGFs上清液中PGE2和MMP-1的含量,以及加入Pg-LPS以及不同信号抑制剂产生PGE2和MMP-1的量。 4.特定浓度hBD3,分别与等体积NF-κB信号抑制剂SN-50,50UM; PI3K信号抑制剂LY294002,20UM; JNK信号抑制剂SP600125,20UM; P38信号抑制剂SB203580,20UM; ERK信号抑制剂PD98059,10UM,分析hBD3刺激HGFs分泌PGE2和MMP-1涉及的信号通路。 结果： 1.采用组织块培养法能够在体外成功培养出HGFs。倒置相差显微镜下观察细胞胞核均染,呈长梭形,并围绕组织块呈放射状排列。抗角蛋白染色阴性,抗波形丝蛋白染色阳性,可见细胞来源于中胚层,结合取材部位证实所培养细胞为HGFs。 2.MTT检测结果显示,10ug/ml的hBD3分别与对照组和0.3ug/ml组相比,差异均有统计学意义(P
近年来随着人们对成体干细胞的研究越来越深入，发现其在组织再生和损伤修复领域发挥着非常重要的作用。牙髓干细胞作为存在于牙髓组织的一种成体干细胞，也是口腔生物学领域的研究热点。它具有很强的增殖能力，在体外经过适当的诱导又能向成骨/成牙、成脂、成神经等方向分化。同时众多的研究也发现移植到体内的牙髓干细胞能够形成牙髓牙本质复合体样结构。因此，牙髓干细胞成功体外分离为构建组织工程牙齿和牙髓损伤修复的研究提供了重大的契机。

细菌内毒素脂多糖（lipopolysaccharide，LPS)是革兰氏阴性菌主要的致病因子。研究发现LPS能够与细胞表面特异性受体TLR4结合调控间充质干细胞的分化。而龋病致牙髓损伤时，脱矿牙本质能释放TGFβl等众多生长因子，促进牙髓干细胞向OBLC分化。而细菌及其毒性产物也会进入牙髓，接触刺激牙髓干细胞，那么细菌及其毒性产物如LPS是否影响牙髓干细胞增殖和定向分化能力？目前尚不清楚。为此，本课题在成功构建牙髓干细胞系的基础上，用LPS对牙髓干细胞进行适当的刺激，旨在探索其对牙髓干细胞增殖分化能力的影响。我们还初步分析了MAPK信号通路在LPS调控的牙髓干细胞分化过程中作用。我们的研究结果如下： 可能 1.牙髓干细胞的分离、培养和鉴定 我们通过酶消化组织块法分离培养原代细胞，采用有限稀释法对得到的原代细胞进行纯化，获得相对较为纯化均一的牙髓干细胞系。然后，我们采用了一系列针对干细胞生物学特性的方法对获得的干细胞进行了鉴定。通过流式细胞仪对细胞的表型进行分析，同时对细胞多向分化能力的进行了检测，结果均符合公认的DPSCs的生物学特征，证明我们已经成功的构建了hDPSCs细胞系。

确认细节 2. LPS对人牙髓干细胞增殖能力的影响 我们通过LPS刺激二维平面和三维立体培养的牙髓干细胞检测其对hDPSCs增殖能力的影响。不同浓度的LPS（0.01-10ug/ml）刺激二维平面培养的牙髓干细胞，MTT检测结果显示LPS在短时间的培养时间（1-5d）内对hDPSCs的增殖能力影响不大，7d时与无刺激因素的对照组相比，各刺激组均出现抑制的现象；而用1ug/mlLPS刺激复合在HA/TCP支架材料上三维立体培养的hDPSCs，电镜观察发现7d组与3d组比较细胞数目明显增多；而3d、7d分别将对照组与LPS刺激组相比细胞数目无显著差异，14d时LPS刺激组较对照组相比细胞数目明显减少。提示LPS长期刺激牙髓干细胞可能会抑制其增殖能力。 3. LPS对人牙髓干细胞定向分化能力的影响 首先，我们通过实时定量PCR检测在牙髓干细胞分化过程中TLR4及相关矿化基因表达情况，发现TLR4在牙髓干细胞表面表达，而且牙髓干细胞分化7天时表达达到最高峰，提示LPS特异性受体TLR4很可能在牙髓干细胞分化早期发挥重要作用。矿化基因DSPP、DMP1、ALP、 OPN在牙髓干细胞在分化过程中均有不同程度的升高。随后，我们分别通过实时定量PCR和茜素红染色分别检测LPS在牙髓干细胞分化过程中对矿化相关基因表达和矿化结节形成情况的影响，结果显示LPS能够显著的促进矿化相关基因DSPP、DMP1、ALP、 OPN的表达；同时LPS刺激也能促进牙髓干细胞矿化结节的形成。我们又通过电镜观察LPS对三维培养的牙髓干细胞胞外基质分泌情况的影响，发现LPS刺激能够促进牙髓干细胞分泌胞外基质及胶原纤维样结构的形成。以上结果证实LPS能够促进牙髓干细胞的定向分化为成牙本质样细胞。以上研究结果与体内牙髓损伤修复的过程类似，该部分的研究为探明牙髓损伤修复的机制提供了可靠的体外研究模型。 4.

05和P<0.01或P<0.01);槐定碱中、高剂量治疗组小鼠血清TNF-α水平均显著低于同时相点LPS模型组(P<0.01或P<0.05)。与LPS模型组比较,槐定碱三个剂量治疗组均不同程度显著下调同时相点LBP、CD14、TLR4的mRNA以及TLR4蛋白的表达;免疫组化检测槐定碱三个剂量治疗组肺组织总p38,阳性细胞数与阳性信号强度的记分值与同时相点LPS组比较均无显著差异;但磷酸化p38阳性细胞显著减少,阳性信号明显减弱,记分值均显著小于同时相点LPS模型组(P<

0.01或P < 0.05)。Western-blot检测槐定碱三个剂量组肺组织总p38蛋白表达均与模型组无显著差异,但槐定碱三个剂量治疗组2h起即有下调磷酸化p38蛋白表达的趋势,6h与12h时与同时相点模型组比较均有显著下降(P<0.01或P<0.05)。槐定碱三个剂量治疗组均不同程度显著下调c-jun和c-fos的mRNA表达(P<0.01或P<0.05)。槐定碱三个剂量治疗组TNF-αmRNA表达的动态变化与血清TNF-α类似。槐定碱三个剂量治疗组之间比较,在6h、12h及24h时相点,中、高剂量组TNF-αmRNA表达均显著低于同时相点低剂量组(P<0.01或P
目的一、通过与传统体外循环(CPB)下冠状动脉旁路移植术(CABG)患者相比较,评价采用非体外循环的方式是否有助于减轻中年CABG患者术后认知功能障碍(POCD)的发生。

而且 PLX4032小白鼠 二、通过比较异丙酚复合利多卡因全凭静脉麻醉和静吸复合麻醉下非体外循环冠状动脉旁路移植术(OPCABG)患者术后的认知功能,探讨OPCABG患者适宜的麻醉管理方式。 方法一、择期拟行CABG患者60例,年龄40～64岁,心功能Ⅰ或Ⅱ级,肝、肾及肺功能未见明显异常,左室射血分数≥45%,近1个月内未发生心肌梗塞,无心衰史、心脏手术史、神经系统疾病史。随机分为非体外循环组(Ⅰ组)和体外循环组(Ⅱ组),每组30例。于麻醉诱导后经右颈内静脉穿刺向头侧置管,使导管尖端位于颈内静脉球部,分别于麻醉诱导后(基础值,T0)、术中(T1,Ⅰ组为移植血管远心端吻合完毕即刻；Ⅱ组为复温至35.5℃,松开主动脉阻断钳,心脏复跳即刻)、术毕(T2)、术后6 h(T3)和术后24 h(T4)5个时间点采集颈内静脉球部血5 ml测定血清S-100蛋白和神经元特异性烯醇化酶(NSE)浓度,测定血清肿瘤坏死因子—α(TNF-α)、白细胞介素—1(IL-1)和白细胞介素—6(IL-6)浓度,并同步采集桡动脉和颈内静脉球部血各1 ml进行血气分析,测定动脉血氧饱和度(SaO2)、动脉血氧分压(PaO2)、颈内静脉血氧饱和度(SjvO2)、颈内静脉血氧分压(PjvO2)、血红蛋白含量(Hb),根据Fick公式计算脑动静脉血氧含量差(Ca-jvO2)及脑血流量／脑氧代谢率比值(CBF/CMRO2)。分别于麻醉前1d和术后3、7 更多 d时对患者进行简易智能状态检查(MMSE)评分,MMSE总分30分,0.05),术后所有患者镇痛效果均良好。所有患者均完成MMSE,Ⅰ组患者术后7d内共有4例发生认知功能障碍,发生率为13%；Ⅱ组共有11例发生认知功能障碍,发生率为37%,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者血清S-100蛋白和NSE浓度于T1时开始升高(P<0.05),T2时达到高峰(P<0.05),T3时已出现下降趋势,但仍高于基础值(P0.05),但Ⅱ组T4时血清S-100蛋白和NSE浓度仍高于基础水平(P<0.05)；与Ⅰ组比较,T1～T44个时点Ⅱ组血清S-100蛋白和NSE浓度均升高(P<0.05)。两组患者T3和T4时点Pa02均低于同组基础水平(P<0.05),Ⅱ组T1时点Pa02高于基础水平(P<0.05)；与Ⅰ组比较,T1时点Ⅱ组PaO2升高(P<0.05)。两组患者SjvO2和PjvO2在T1时点均低于同组基础水平(P0.05)；与Ⅰ组比较,T1时点Ⅱ组SjvO2和PjvO2均降低(P<0.05)。两组患者T3和T4时点Hb均低于同组基础水平(P<0.05),Ⅱ组T1时点Hb低于基础水平(P<0.05)；与Ⅰ组比较,T1时点Ⅱ组Hb降低(P<0.05)。两组患者T1时点Ca-jvO2均高于同组基础水平(P<0.05),T3和T4时点Ca-jvO2均低于同组基础水平(P<0.05)；与Ⅰ组比较,T1时点Ⅱ组Ca-jvO2升高(P<0.05)。与Ⅰ组比较,Ⅱ组T1～T4时点血清TNF-α、IL-1和IL-6浓度升高(P<0.05)；与T0时点比较,Ⅰ组T3时点、Ⅱ组T1～T4时点血清IL-1和IL-6浓度升高(P0.05),术后所有患者镇痛效果均良好。两组患者均完成MMSE,

S组患者术后7d内共有8例发生认知功能障碍,发生率为27%；P+L组共有2例发生认知功能障碍,发生率为7%,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者血清S-100蛋白和NSE浓度于手术开始后升高,T1时达到高峰(P<0.05),T2时已出现下降趋势,但仍高于基础值(P0.

0193，差异有统计学意义（P＜0.05）。 2．Rab25蛋白骨肉瘤组织的相对表达量为0.4326±0.1058，癌旁组织的相对表达量为0.1024±0.0145，差异有统计学意义（P＜0.05），ERK蛋白骨肉瘤组织的相对表达量为0.5466±0.1895，在癌旁组织中的相对表达量为0.1256±0.0111，差异有统计学意义（P＜0.05）。 3．不同病理类型的骨肉瘤组织Rab25和ERK mRNA和蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05） 结论 1．Rab25和ERK mRNA在骨肉瘤组织中的表达高于癌旁组织。 2．Rab25和ERK蛋白在骨肉瘤组织中的表达高于癌旁组织。 3．Rab25和ERK mRNA和蛋白在不同病理类型骨肉瘤组织中的表达水平差异无统计学意义。
肿瘤细胞的增殖、黏附、迁移及侵袭能力受体内神经内分泌的影响，并与肿瘤的发生进展密切相关。卵巢癌是女性生殖器官常见的肿瘤之一，由于卵巢上皮细胞的生物学特性及卵巢癌的病理类型均很复杂，因此卵巢癌的发生发展机制至今还不很清楚。已知在卵巢癌中糖皮质激素受体（glucocorticoid

receptor，GR）的阳性率高达88％以上，比雌激素受体和孕激素受体的阳性率（50％）还高，在卵巢癌细胞系中也检测到GR的存在，提示糖皮质激素（glucocorticoids，GCs）在卵巢上皮的功能调节中发挥重要作用，并有可能参与卵巢癌的发生和发展过程。已有研究提示，慢性应激能影响肿瘤的发生和发展，因此作为体内主要的应激激素，阐明GCs对肿瘤细胞生物学行为的影响具有重要的理论和临床意义。 但是迄今为止，关于糖皮质激素对卵巢癌细胞生物学特性的影响了解的仍不多，糖皮质激素在卵巢癌细胞迁移或侵袭过程中的作用至今未见研究报道。我们前期的工作发现人工合成的糖皮质激素——Dex能够抑制卵巢癌细胞的增殖、诱导卵巢癌细胞发生形态改变，并促进细胞与细胞外基质（extracellular

matrix，ECM）的黏附。在此基础上，我们进一步研究了Dex对细胞骨架和细胞迁移的影响及其可能的机制。 我们用罗丹明-鬼笔环肽（rhodamine-phalloidin）对细胞骨架肌动蛋白（F-actin）染色，观察了100nM Akt抑制剂 Dex处理HO-8910细胞前后肌动蛋白骨架的变化，发现对照细胞肌动蛋白骨架主要分布于膜周，而100nM Dex处理细胞后可导致细胞骨架肌动蛋白的重构并诱导应力纤维的形成。我们又进一步观察了Dex对卵巢癌细胞迁移能力的影响。细胞划痕实验（scratch assay）的结果表明，Dex处理卵巢癌细胞HO-8910和SKOV3后两种细胞的划痕愈合速度较对照均减慢。用Transwell实验（cellmigration assay）的方法发现Dex处理后HO-8910细胞和SKOV3细胞的迁移能力明显被抑制，发生迁移的细胞数量分别为对照的55%和57%（p
文献报道，2011年美国新发乳腺癌230480例，死亡39520例。乳腺癌是全球女性的健康杀手。因此对现有治疗方法的优化和研究新型药物就显得尤为重要。 目前，乳腺癌的治疗手段主要为手术治疗，放疗和化疗。但是手术治疗时，需要大面积的清扫乳癌周围组织，术后严重降低女性的生活质量，基于此项原因，药物的合理开发和应用就迫在眉睫。早期主要应用特异性内分泌性抗乳癌药物，具体分为以下几种：一，雌激素受体抑制剂类（代表药物：他莫昔芬、氟维司群）；二，芳香类酶抑制剂类（代表：阿那曲唑、来曲唑、依西美坦）。他莫昔芬一直作为乳癌治疗的金标准为广大医生和患者接受，但是近年来，不断的出现耐药病例，使得多种药物联用和新药研发开始受到重视。 本实验研究的化合物，Ophiobolin O（蛇孢假壳素O）是首次从焦曲霉094102（Aspergillus ustus094102）发酵物中发现的结构新颖的蛇孢假壳素类二倍半萜烯化合物。文献报道，已经发现的30余种蛇孢假壳素类化合物，具有广谱的抗菌活性，如抗线虫，抗真菌及抗细菌等，此外还对多种肿瘤具有显著细胞毒活性。我们的前期研究发现，蛇孢假壳素O能够抑制多种肿瘤细胞的生长，如肺癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌，其中对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用尤其明显。蛇孢假壳素O诱导MCF-7细胞早期凋亡以及G0/G1期细胞周期阻滞。随后对作用机制进行探讨。PI3K/AKT,MAPK等下游的信号转导通路受到激活，影响Bcl-2家族蛋白、Cyclin家族蛋白以及更下游基因的表达，从而促进肿瘤的发生和增殖发生变化。Cyclin http://www.selleckchem.cn/products/dinaciclib-sch727965.html D1是一种细胞周期相关性蛋白，在促使细胞通过G1期检验点，从G1进入S期过程中发挥重要作用。同时Cyclin D1也是一种雌激素反应性基因，具有ERE元件，同样的还有PR基因。我们观察到在蛇孢假壳素O可以使得Cyclin D1的Thr286磷酸化增加。Cyclin D1的Thr286磷酸化是Cyclin D1走向泛素化降解的标志。因此，蛇孢假壳素O可能引起了Cyclin

D1磷酸化的降解增加，部分地解释了蛇孢假壳素O存在的条件下引起的G1期阻滞。同时，蛇孢假壳素O激活MAPK通路关键蛋白JNK、p38、ERK等。JNK-MAPK的激活可能诱导了细胞凋亡。Bcl-2家族蛋白主要分为两类，一类为抑制凋亡产生的蛋白，如Bcl-2；另一类为激活细胞凋亡的蛋白，如Bax。蛇孢假壳素O抑制Bcl-2蛋白的表达，刺激Bax蛋白的表达。Bax与Bcl-2比值上升通常被认为是细胞凋亡的一个指征。在此基础上，本课题通过组织形态学观察、MTT法、流式细胞术、RT-PCR、western 3-MA 价格 blot等多种手段，研究蛇孢假壳素O抗乳腺癌MCF-7细胞作用机制，探讨其靶分子以及相关信号通路变化。通过研究，为乳腺癌治疗提供新的可靠的潜在药物。 总之，我们通过实验发现，蛇孢假壳素O能够激活MAPK通路，降低GSK-3β的非磷酸化表达，抑制反应性基因Cyclin D1的转录，抑制Bcl-2蛋白的表达，激活Bax蛋白表达，引起细胞周期阻滞，诱导细胞凋亡。因此，蛇孢假壳素O作为一种新型抗乳腺癌化合物，值得进一步研究。
目的本实验通过观察喔曼青霉素（Wortmannin）对大鼠重症急性胰腺炎急性肺损伤（SAP-ALI）时肺组织含水率、病理损伤情况、髓过氧化物酶(myeloperocidase，MPO)、基质金属蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-9，MMP-9），以及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/PKB）信号通路表达等情况的影响，以探讨喔曼青霉素对大鼠肺组织的保护作用机制及PI3K/PKB信号转导通路对重症急性胰腺炎肺损伤发病的影响。 方法将健康成年雄SD大鼠56只随机分为SO组、SAP组、SAP+W组,采用胰胆管逆行匀速注入4％牛磺胆酸钠（0.1ml/100g）方法制作SAP-ALI模型。SAP+W组于造模前2小时腹腔注射Wortmannin1.

免疫组织化学染色分析检测结果 ICAM-1及VCAM-1:土黄色区域为阳性信号,主要分布于主动脉内膜,而中膜也有少量表达。NC组主动脉ICAM-1及VCAM-1蛋白表达很低;MS组ICAM-1及VCAM-1表达明显增强;HLJDT组ICAM-1及VCAM-1表达较MS组明显减弱。 以各视野IOD值作为反应ICAM-1及VCAM-1蛋白表达的定量指标结果:与NC组比较,MS组主动脉ICAM-1及VCAM-1表达升高(P＜0.01);与MS组比较,HLJDT组ICAM-1及VCAM.1表达降低(P＜0.01)。 5.实时定量RT-PCR检测结果 与NC组比较,MS组主动脉MMP-2、ICAM-1、VCAM-1、IL-6、TNF-αmRNA表达明显升高(P＜0.01);与MS组比较,HLJDT组MMP-2、ICAM-1、VCAM-1、IL-6、TNF-αmRNA表达降低(P＜0.01～0.05)。 6.三组大鼠磷酸化p38MAPK、ATF-2及MMP-2蛋白表达水平检测结果 与NC组比较,MS组主动脉磷酸化p38MAPK、磷酸化ATF-2及MMP-2蛋白表达明显升高(P＜0.01);与MS组比较,HLJDT组磷酸化p38MAPK、磷酸化ATF-2及MMP-2蛋白表达明显降低(P＜0.01～0.05)。 结论 1.MS大鼠存在主动脉肥厚性重构,且主动脉炎症反应增强,这可能是MS血管并发症发生率较高的基础。

2.炎症通过激活p38MAPK,上调MMP-2表达,加速MS大鼠血管重构的发生发展。 3.黄连解毒汤通过抗炎抑制p38MAPK激活,进而减少ATF-2及MMP-2的表达,起到干预MS大鼠主动脉重构的作用。
ADAM 也许 (A Disintegrin And Metalloproteinase)是一类含有七个功能结构域并在细胞间相互识别和相互作用中发挥重要作用的跨膜糖蛋白家族。ADAM15作为该家族唯一在去整合素结构域(disintegrin)含有RGD(Arg-Gly-Asp)基序的成员,在细胞外基质降解、细胞粘附、细胞内信号转导和肿瘤的病理变化等过程中发挥重要作用,但是其抗肿瘤机理需进一步阐释。本文在成功获取高表达水平的重组人ADAM15去整合素结构域蛋白片段(rhddADAM15)的基础上,以小鼠黑色素瘤细胞(B16)为研究模型,研究rhddADAM15对B16细胞体外增殖、粘附和迁移等细胞行为的影响,通过筛选rhddADAM15特异结合的12肽以及rhddADAM15在B16细胞上相互作用的靶点蛋白,探讨rhddADAM15干预肿瘤细胞行为的生理机制。主要研究结果如下: 这个 1)为获得大量具有生物活性的rhddADAM15蛋白,在详尽分析目标蛋白的cDNA序列的基础上,(1)选择能为大肠杆菌稀有密码子提供额外tRNA的大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)作为宿主菌,将目标蛋白以GST(Glutathione-S-transferase)融合蛋白形式表达,在最佳诱导表达条件下融合蛋白GST-ADAM15浓度为298 mg/L,最佳凝血酶酶切条件下,rhddADAM15浓度为42 mg/L; (2)采用PCR体外定点突变技术将凝血酶识别序列附近稀有密码子GGA(Gly)替换为GGC,同时消除Pro-Glu-Phe残基,构建突变表达质粒,提高凝血酶酶切效率。在相同的表达和酶切条件下获得GST-△-ADAM15和rhddADAM15蛋白浓度分别为326

mg/L和68mg/L,比野生型分别提高9.4%和61.9%。这一结果表明,在充分认识目标蛋白特性的基础上定向选择表达宿主并改造表达质粒能实现外源蛋白高水平表达; 2)采用MTT法测定rhddADAM15对B16、MCF-7/W以及HMEC-1细胞体外增殖的作用,采用创伤愈合实验、Matrigel基质胶以及Transwell侵袭小室法观察rhddADAM15对B16细胞体外迁移、粘附和侵袭的影响;采用台盼蓝染色法分析细胞活力、流式细胞仪检测rhddADAM15对B16细胞周期的影响。结果表明rhddADAM15对肿瘤细胞和正常内皮细胞生长均有一定的抑制作用(其IC50分别为9.5、11.8和14.9μg/mL),且明显抑制B16细胞的体外增殖、迁移、粘附和侵袭。台盼蓝染色法表明低剂量的rhddADAM15并不能导致B16细胞出现坏死,且rhddADAM15并不导致B16细胞出现典型的凋亡峰,而是将细胞阻滞于G2/ M期,并且这种作用呈剂量依赖关系; 3)采用亲和甄别磁珠技术筛选rhddADAM15在B16细胞上的结合蛋白。将rhddADAM15采用蛋白生物素化方法标记生物素,借助生物素-亲和素系统,将生物素化的rhddADAM15固定于亲和素标记的免疫磁珠。从B16细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白,经浓缩富集后,采用双向电泳分离技术分离获得主要的结合蛋白点,然后对这些蛋白点进行电喷雾串联质谱技术(ESI-MS)分析,在蛋白数据库中检索,共鉴定了8个蛋白质,按功能可分为如下三类:(1)临床应用的肿瘤标志物(苹果酸脱氢酶、磷酸甘油醛脱氢酶和谷氨酸脱氢酶);(2)能量代谢相关蛋白(烯醇酶、磷酸丙糖异构酶、原肌球蛋白和血红蛋白);(3)信号转导通路成员(p38MAPK激酶)等。在此基础上通过分子对接软件molsoft

ICM模拟计算获得rhddADAM15与p38激酶相互作用的最佳模式和重要的结合位点; 4)采用噬菌体展示技术筛选与rhddADAM15特异性相互作用的多肽序列。采用噬菌体随机十二肽库对固定有rhddADAM15的亲和磁珠系统进行生物淘洗,获得4条与rhddADAM15特异结合的12肽。将获得的12肽与蛋白质库进行序列比对,发现细胞周期相关蛋白如Cdc25和p53,信号通路相关蛋白/受体,如整合素αvβ3的胞外区,丝裂原活化蛋白激酶p38α等与所获得的4条12肽具有高度同源性; 寻找更多 5)基于上述研究所获得的rhddADAM15在B16细胞上潜在的靶点蛋白,进一步研究rhddADAM15与p38MAPK激酶的体外相互作用,结合rhddADAM15对B16细胞行为的抑制作用,采用蛋白点杂交和激酶活性测定方法分析rhddADAM15在体外与重组p38激酶蛋白的结合情况,同时研究不同剂量rhddADAM15对B16细胞中p38MAPK激酶磷酸化水平的影响,并观察rhddADAM15对p38激酶活性受到部分抑制的B16细胞的增殖和细胞周期抑制作用的变化。发现:(1)rhddADAM15在离体低温条件下能够和重组p38激酶蛋白结合,但rhddADAM15(0-10μg/mL)在体外对p38MAPK激酶活性没有影响;(2)同样剂量的rhddADAM15作用于B16细胞24 h后,细胞中p38MAPK激酶的磷酸化水平提高(被激活);(3)p38激酶的特异性抑制剂SB203580(0.5 mmol/L)预处理B16细胞30 min后,rhddADAM15对细胞增殖的抑制作用减弱(IC50由未经处理的9.5μg/mL增加到11.4μg/mL),对细胞周期的阻滞作用也减弱(G2/M期细胞比率从未经处理的的28.