在医药领域,吡唑类衍生物对许多疾病具有治疗作用,研究表明吡唑类化合物具有抗癌、杀菌、抑菌、消炎、止痛等药理活性。在农药领域,吡唑类化合物具有杀菌、杀虫和除草活性。MAPK信号传导通路是生物体内重要的信号转导通路之一,在真核生物细胞的生长,增值,存活和分化过程中发挥着重要的作用。细胞信号转导的过度激活与肿瘤的发生有关。RAF激酶在MAPK信号传导通路起着重要的作用。在http://www.selleckchem.cn/products/BIBF1120.html哺乳动物细胞中RAF家族包括ARAF, BRAF和CRAF三个成员。大约8%的人类肿瘤发生BRAF突变,BRAF绝大多数的突变形式为BRAFV600E突变,主要发生于黑色素瘤、甲状腺癌和结肠癌中。因此,BRApV600E成为了当今抗肿瘤药物研发的热门靶标。BRAFV600E抑制剂的基本结构包含一个氢键供体,通常是吡唑,吡啶或咪唑的杂环和取代可能的芳族基团与疏水口袋相互作用。为了获得一个更好的具有氢键和疏水作用的合适长度基团,我们合成了一系列(1,3-二苯基-1H-吡唑-4-基)甲基苯甲酸酯衍生物。体外测试目标化合物对A375和WM266.4的抗增殖活性,实验表明,大部分化合物低毒并具有较强的抗肿瘤活性,其中化合物10a活性最强,其对A375和WM266.4的IC50分别为IC50确认细节=1.36μM,0.94μM(阳性对照vemurafenib对A375和WM266.4的IC50分别为0.20μM和0.06μM)。体外测试化合物的BRAFV600E抑制活性,化合物10a的BRAFV600E抑制活性依然最好。为进一步探讨目标化合物可能作用机制,进行了计算机模拟对接研究,研究表明化合物10a紧紧的嵌入到蛋白的活性结合口袋。这说明化合物10a可能是很好有研究前景的以BRAFV600E为靶点的抗癌先导化合物。

本论文以Aurora激酶为靶点,以VX-680为先导化合物,利用合理药物设计,通过两步反应简捷高效地合成了16个2,4,5-三取代嘧啶类目标化合物,并对其体外细胞毒性及对肿瘤细胞循环周期的影响等进行了研究。结果显示这些化合物大部分比VX-680具有更强的细胞毒性,其中化合物2-[N-(1-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺-4-基]氨基-4-环戊胺基-5-硝基嘧啶此网站(52)最强,其对HCT8、A549、HeLa和HepG2的IC50值约为3至10 μM。同时该化合物对HCT8细胞循环阻断在G1期。由此可见,这类化合物具有潜在的开发价值,我们将进一步对其进行抗肿瘤活性及其机制的深入研究。
目的：本文主要寻找新型Aurora激酶抑制剂(TZA系列)的抗肿瘤活性。通过计算机辅助药物设计的方法设计购买MS-275合成了一系列以吡唑-氨基喹唑啉为母体的化合物,筛选其药理活性,从而寻找新型抗肿瘤先导化合物。 方法： 1.从RCSB Protein Data Bank选取Aurora A、Aurora B及其它丝氨酸／苏氨酸激酶晶体结构作为受体,通过Schrodinger9.0软件的分子对接功能与受试分子进行对接。选取已报道的Aurora A和Nutlin-3研究购买B抑制剂Hesperadin、ZM447439、 MK0457、MLN8054、PHA-739358、AZD1152及其活性代谢产物AZD1152-HQPA作为阳性配体,选择无Aurora激酶抑制活性的hydrocortisone、captopril、clofibrate和aspirin作为阴性配体,通过分级评价结果初步判断受试分子与受体的特异性结合能力,探索受试分子可能的Aurora A和B抑制作用及选择性。

当LBH589和硼替佐米联合作用于Raji细胞时，细胞凋亡率明显增加。 3流式细胞术检测LBH589、硼替佐米及两药联合作用于Raji细胞对Fas蛋白表达率的影响：与对照组相比，LBH589单药可上调Raji细胞Fas蛋白的表达率，而硼替佐米单药处理Raji细胞的Fas蛋白表达率无明显变化。 4流式细胞术检测LBH589、硼替佐米及两药联合作用selleck怎么样于Raji细胞对Bcl-2蛋白表达率的影响：与对照组相比，LBH589单药或硼替佐米单药均可下调Raji细胞bcl-2蛋白的表达率，当两药联用时，表达率明显下调。 5Realtime-PCR方法检测LBH589、硼替佐米及两药联合组作用于Raji细胞后NF-κB mRNA表达水平变化：在一定浓度范围内，LBH589单药GS-7340数据表或硼替佐米单药均可下调NF-κB mRNA的表达水平，且随药物浓度增加NF-κB mRNA表达水平下调，两药联用时，作用明显增强。 6Western Blot法检测LBH589、硼替佐米及两药联合作用于Raji细胞后NF-κB（p65）蛋白表达的影响：LBH589单药或硼替佐米单药均可下调NF-κB（p65）蛋白的表达为什么，当两药联用时，作用明显增强。 结论: 1在一定的浓度范围内，组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589可以抑制伯基特淋巴瘤细胞株Raji细胞的增殖、诱导细胞凋亡，机制可能与上调Fas蛋白、下调bcl-2蛋白和NF-κB（p65）蛋白的表达相关。 2在一定的浓度范围内，蛋白酶体抑制剂硼替佐米可以抑制人伯基特淋巴瘤细胞株Raji细胞的增殖、诱导细胞凋亡，机制可能与下调bcl-2蛋白和NF-κB蛋白的表达相关。

因此,从人类流行病学调查的结果及动物实验研究的证据可以获得以下科学推论,女性绝经期前的雌激素水平对胃癌的发生起到一定的抑制作用,即所谓雌激素的保护性作用。这种保护性机制是如何实现的一直不清楚。这是本文将研究的内容之一,即雌激素对胃癌的发生与发展起什么作用以及通过了什么关键途径。 己知雌激素至少包括雌酮(E1)、雌二醇(E而且2)、雌三醇(E3)以及雌四醇(E4)等,其中雌二醇的生物学活性最强,分别是雌酮及雌三醇的3倍和10倍,也是目前雌激素替代治疗的主要药物成分之一。E2通过雌激素受体(estrogen receptor, ER)发挥作用。ER至少包括ER-α和ER-β两个亚型,其中ER-α又包括ER-α66(传统确认细节意义上的ER-α)、ER-α46和新近发现的ER-α36等三个亚型。在未发现ER-α36以前,以往的研究表明,胃癌组织中ER-α和ER-p的表达不高,并且变异比较大(胃癌组织中ER-α的阳性率为2-28%),并且对ER-α(ER-α66)阳性的胃癌患者给予tamoxinfen治疗,并没有取得与乳并且腺癌一致的疗效。因此,质疑雌激素以及雌激素受体介导的信号在胃癌中发挥作用的推论。 ER-α36是ER-α(ER-a66)的亚型,ER-α36的第一个启动子位于ER-α66的第一个内含子中,缺乏ER-α66的两个转录激活域(AF-1和AF-2),但是保留了DNA结合域,部分的受体二聚化域及配体结合域。ER-α36的氨基酸序列已经很清楚,由310个氨基酸组成,分子量35.7KD。

由于其对化疗具有耐药性,而且预后相对较差。随着对病理学以及分子遗传学进行的研究不断深入,人们对卵巢癌病理机制的理解以及认识不断加深,这就为诊断方法以及治疗措施提供了证据。鉴于此,对卵巢浆液性癌的病理发病机制进展作综述。
目的研究PARP抑制剂WZ-8对人源性肿瘤细胞增殖及裸鼠移植人结肠癌(HCT116)生长的抑制作用。方法 SRB染色法和裸小鼠移植瘤模型研究WZ-8在体内外抗肿瘤作这个用。结果体外WZ-8对多种人肿瘤细胞增殖有明显抑制作用,其中对结肠癌细胞HCT116的半数抑制浓度IC-50为(0.21±0.01)-g·mL1。体内研究表明WZ-8(20 mg·kg-1)对小鼠移植HCT116肿瘤生长有一定抑制效果,其体内外抗肿瘤活性均高于同类化合物Iniparib。结论 WZ-8在体外对人源性肿瘤细胞增殖有明显抑制作用,在体内可抑制裸鼠很少移植人结肠癌细胞HCT116的生长。
聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)通过碱基切除修复方式对单股DNA进行修复,是近年来在癌症治疗领域非常热门的一个靶点。目前,PARP抑制剂在多个肿瘤适应症中进入了临床试验。众多的试验数据表明PARP抑制剂不仅可以作为化疗和放疗的增敏剂,而且在BRCA1/2基因突变的乳腺癌中可单独使用,选择性杀死DNA修复缺陷的癌细胞。很少本文主要对在研PARP抑制剂的作用机制以及5个最重要的PARP抑制剂的临床研究结果进行了综述。
当前手术不可能彻底治愈恶性胶质瘤,因此辅助治疗就非常重要,目前最为成熟、应用最多的是放疗和化疗,化疗和放疗的本质是造成DNA的损伤,导致细胞死亡或凋亡,从而达到治疗的目的。然而,一方面,任何细胞在DNA遭受损伤后都会启动一定的修复机制,使细胞免于死亡;另一方面,不同的细胞其DNA修复的能力存在着差异,正常细胞DNA修复能力略强于肿瘤细胞。

方法采用逆转录聚合酶链式反应(reverse anscription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)方法检测32例前列腺癌、癌旁前列腺组织中Shh、Ptc和Gli1 mRNA的表达。结果 Shh、Ptc和Gli1 mR以及NA在前列腺癌组织中的表达均高于癌旁组织(P<0.05),Shh与Ptc的表达呈正相关(P<0.05)。结论在前列腺癌Hh信号通路中Shh、Ptc和Gli1mRNA呈现高度表达状态,存在Hedgehog信号通路的激活现象,GliGefitinib供应商1表达上调促进前列腺癌细胞的增殖和分化以及前列腺癌的发生和发展。
目的:研究Aurora激酶抑制剂ZM447439对体外培养的人乳腺癌细胞T47D生长和细胞周期各时相的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐法测定ZM447439对乳腺为什么癌T47D细胞增殖的影响;克隆形成实验检测ZM447439对T471D细胞增殖的影响;流式细胞术检测ZM447439对乳腺癌T47D细胞周期各时相的影响。Western blot检测ZM447439对Aurora A,p-AuroraA,HistoneH3,p-HistoneH3以及CytlinBl的影响。

将稳定表达rh-K5的MDA-MB-231细胞培养上清作用于BCE和ECV304细胞后，对两者增殖有抑制作用，而其自身的增殖无明显影响；将pcDNA3K5与pShuttle重组得到的克隆pShttleK5与复制缺陷型腺病毒DNA重组，转化DH5α得到重组克隆pAd-K5，转染HEK293细胞，在其中包装、扩增后制备Ad-K5，将其感染BCE、ECV304细胞和MDPD0325901A-MB-231细胞，对BCE和ECV304细胞增殖有抑制作用，并抑制BCE和ECV304细胞形成毛细血管样管腔结构，对MDA-MB-231细胞增殖无明显影响。 三、 人纤溶酶原K5 结构域基因转染动物实验 将稳定表达rh-K5的MDA-MB-231细胞在体外培养、扩增后接种至BALB/c nu/nu裸小鼠皮下，制备裸鼠乳腺癌模型，观察转Staurosporine半抑制浓度染pcDNA3K5对肿瘤生长的影响，测肿瘤体积，绘制生长曲线，接种后30d，处死动物，测瘤重，RT-PCR检测K5 mRNA表达；免疫组化：VIII因子相关性抗原(factor VIII related antigen, FVIIIRAg)标记血管内皮细胞，计数肿瘤微血管，检测血管内皮生长因子(vascular endothelial g所以rowth factor, VEGF)、凋亡相关蛋白Bcl-2和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)的表达。 与未转染和转染pcDNA3的MDA-MB-231细胞比较，转染pcDNA3K5的MDA-MB-231细胞在裸小鼠皮下生长延缓，肿瘤体积较小，瘤重较轻，其差别有统计学意义(P 降低(P0.05)，说明rh-K5通过抑制肿瘤新生血管生成抑制肿瘤生长。

确定shRNA-STAT3序列：根据Genebank中检索到人STAT3全长开发读码框(open reading frame, ORF),调取3条不同的RNAi Consortium数据库中经商业验证的shRNA-STAT3序列,并进行BLAST验证比对。 重组载体pSilencer4.1_CMV_STAT3的构建与鉴定：以这三条验证有效的siRNADabrafenib细胞系干扰序列为基础,遵从Ambion公司提供的pSilencer4.1_CMV载体构建说明,将其设计为特异性的shRNA-STAT3单链模板。将合成的3对单链寡核苷酸经HPLC纯化、等比例混合退火后,与经BamHI和Hind Ⅲ双酶切线性化的pSilencer4.1_CMV按说明书建议比例以T4DNA连接酶16℃过夜连接；环化成点击此处功的质粒转化DH5a;以Amp筛选阳性克隆并挑取之,然后过夜摇菌扩增；小提质粒双向测序鉴定；中提并纯化成功构建的干扰质粒pSilencer4.1_CMV_STAT3,分装备用。 克隆STAT3基因：根据Genebank检索到人STAT3基因最长转录本的开发读码框(open reading frame, ORF),设计带有酶切BVD-523订单位点的引物,以H2228细胞总cDNA为模板进行扩增 重组质粒pcDNA3.1+STAT3的构建及鉴定：将模板扩增PCR产物纯化后与克隆载体pMD-18T连接,转化感受态、筛选阳性克隆并扩增；抽提质粒行双向测序等鉴定。中提并纯化重组质粒,分装保存等步骤获取重组载体pcDNA3.1+STAT3。 瞬时转染：应用Roche Fugene6转染系统,将重组质粒和对照质粒转染人肺腺癌细胞株H2228和H1299。

EML4-ALK融合基因的发生率为3%~11%,该融合基因在年轻、腺癌、不吸烟或轻度吸烟的NSCLC患者中发生率较高,表达阳性者可以受益于ALK抑制剂(如克唑替尼)的治疗。本文重点阐述NSCLC中EML4-ALK融合基因的生物学特性、检测方法、临床特征和治疗方式。
EML4-ALK是肺癌诱发基因之一,属于融合基因,2007年由日本学者首次报道。在有非小细胞肺癌(non-small-celllung carcinoma,NSCLC)患者中EML4-ALK表达阳性率约为3%～8%。EML4-ALK融合基因存在多种不同结构的变异体,其中3种变异体占大多数,其他变异体相对较少。目前尚无标准的、快速简便的检测EML4-ALK的方法,使其临床应用推广受到限制,有待进一步研究。新Selleckchem MS 275近的临床研究发现,EML4-ALK阳性率和患者是否吸烟高度相关,也与年龄、腺癌以及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和KRAS基因是否突变等因素相关。其中不吸烟或轻度吸烟的NSCLC患者EML4-ALK阳性率高达9.4%,而在吸烟的患者中其阳性率只有2.9%,两者selleck screening library存在显著性差异。EML4-ALK表达阳性与EGFR、KRAS突变呈负相关。在NSCLC患者中EML4-ALK表达和EGFR、KRAS突变很少同时存在。EML4-ALK的抑制剂TAE684和PF02341066等目前已进入Ⅲ期临床试验,前期研究取得了较好的疗效。EML4-ALK现已成为NSCLC治疗的新靶点,EML4-ALK抑制剂为肺癌的个体化治疗提供了新的可选择方案,也可作为不能耐受化疗的患者的治疗药物。

应用半定量PCR和/或实时定量PCR检测进行实验研究,发现CCND1,AURKA和NEDD9在结直肠癌组织和三个细胞系中都有不同程度的表达上调,以AURKA最为显著,CCND1次之。MTT、CCK-8和流式细胞术的结果表明,分别沉默AURKA和CCND1后SW480细胞的G1-S细胞周期进程受抑制,导致细胞的增殖能力显著下降;而且结直肠癌细胞SW480的凋亡增加。总而言之,我们尝试GSK1120212体外了用各种生物信息学分析方法来挖掘结直肠癌相关的基因,用相关实验技术检测了关键基因在结直肠癌组织和细胞系中的表达情况,并对这些关键基因进行了初步功能分析探索。发现与正常样本相比,在结直肠癌样本中我们总共筛选到1640个差异表达基因。其中如DEPTOR,AURKA,CCND1,BCAS1,NEDD9和MAP2K2等亲和度较高的基因可能通过影响细胞周期、参与信号selleck通路等方式影响了结直肠恶性肿瘤的发生发展过程。而且,我们检测到了可能作用于CCND1,AURKA和DEPTOR的药物。然而,这些都是通过生物信息学分析得到的预测性结果,需要通过实验研究来进一步验证它们的准确性。随后,我们通过实验检测发现CCND1和AURKA在结直肠癌组织和SW480细胞中显著上调表达。此外,AURKA或CCND1沉默后,SW480细胞的GMetformin购买1-S细胞周期进程受抑制,导致细胞的增殖能力显著下降;而且,SW480细胞的凋亡增加,提示AURKA和CCND1可能是结直肠肿瘤发病机制中的重要基因,并通过影响细胞周期来调控结直肠癌。这与前面生物信息学分析中关于关键基因筛选及其作用机制的结果基本一致。因此,我们目前的研究结果对今后进一步深入探索结直肠癌的早期基因筛查和靶向治疗有重要的启示作用,也为分析、探索通过生物信息学筛选出来的其他差异表达基因在结直肠癌中的作用提供了前提和理论基础。