5μM汉黄芩素处理24h的抑制率为17.27%，当汉黄芩素浓度达到160μM时，对QG56的抑制率接近40.55%，分别用25、50、100和160μmol/L汉黄芩素处理24小时后三次实验测得各组抑制率分别为（20.51±1.32）%、（29.55±1.02）%、（32.56±0.51）%和（40.18±0.37）%，而24、48、72小时的半数抑制浓度（IC50值）分别为（63.45±7.02）μM、（52.60±8.09）和（38.37±7.82）μM。流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双标法检测证实了汉黄芩素能诱导QG56细胞凋亡,分别用25、50、100、160μmol/L汉黄芩素处理QG56细胞48小时后，凋亡率分别为20.79%、37.28%、50.88%和65.56%，当汉黄芩素浓度达到160μmol/L时，QG56细胞的最大凋亡率达到65.62%。倒置显微镜下观察，加药前，细胞贴壁良好，呈多边形，大小适中，核仁清晰，细胞连接成片，加药后细胞形态不规则、贴壁不佳、染色质浓缩、细胞突起消失。流式细胞术检测细胞凋亡：结果显示，细胞凋亡率随汉黄芩素浓度增加而增加，说明汉黄芩素可以明显诱导QG56细胞凋亡。荧光显微镜下观察，早期凋亡细胞呈绿色荧光，晚期凋亡呈红色荧光，Western

Angiogenesis抑制剂 blot检测磷酸化胞外信号调节激酶（p-ERK1/2）蛋白表达随药物浓度增大而明显下调，而阴性对照组P-ERK1/2蛋白水平无明显变化。表明汉黄芩素可以诱导肺癌细胞凋亡，RAF-MAPK-ERK可能是其作用的信号通路。 结论： （1）随着汉黄芩素浓度的增加，QG56细胞的生长抑制率明显升高，说明汉黄芩素具有抑制人肺癌QG56细胞生长增殖的作用。 （2）随着汉黄芩素浓度的增加，QG56细胞的凋亡率也明显增加，提示汉黄芩素具有诱导QG56细胞凋亡的作用。 （3）随着汉黄芩素浓度的增加p-ERK1/2的表达下降，提示其作用机制可能与抑制以p-ERK1/2为关键分子的信号传导通路有关，汉黄芩素有望作为新的抗癌药物应用于临床。
目的： 1.检测已经建立的非小细胞肺癌放射抗拒细胞系的放射敏感性。 2.初步探讨PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂LY294002和Rapamycin对大分割放疗的增敏作用。 方法： 1.体外培养A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞。3种细胞均接受射线照射,克隆形成实验检测照射后3种细胞增殖能力的差异；免疫荧光实验检测3种细胞放疗后24h残留的yH2AX焦点的差异。 2.体外培养A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞。实验分组：对照组(A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞)、LY294002组、Rapamycin组、LY294002+Rapamycin组,给予相应的射线照射。通过克隆形成实验检测加入抑制剂LY294002和／或Rapamycin后大分割放疗抗拒细胞放疗后的增殖能力；通过免疫荧光实验检测加入抑制剂LY294002和／或Rapamycin后大分割放疗抗拒细胞24h后的yH2AX焦点数。应用SPSS17.0统计分析软件包,实验数据以均数±标准差(x士S)表示,在检验数据正态分布及方差齐性的条件下,多组间数据比较采用方差分析,各组组间差异的比较用LSD—t检验。以P值<0.05),单抑制剂组与A549对照组相比未见明显差异,而双抑制剂组较A549组明显增加(P
实验目的：

并且 研究小檗碱抑制结肠癌HCT116细胞增殖与Wnt/β-catenin信号之间的关系及可能机制。 实验方法： 采用结晶紫染色、免疫荧光、流式细胞术、RT-PCR、Western blot、报告质粒等技术，研究小檗碱抑制HCT116细胞增殖与Wnt/β-catenin信号之间的关系及其可能的机制。具体方法如下： 1.分别采用结晶紫染色、免疫荧光、流式细胞术,检测小檗碱对结肠癌细胞HCT116增殖、凋亡和周期的影响。 2.利用荧光素酶报告质粒,检测小檗碱对HCT116细胞Wnt/β-catenin信号转导的影响。 3.通过Western blot检测，小檗碱对HCT116细胞总蛋白和胞浆/核蛋白中β-catenin蛋白水平以及Wnt下游目的基因表达的影响。

4.利用重组腺病毒技术，检测在过表达及沉默表达β-catenin的情况下，小檗碱对HCT116细胞增殖的影响。 5.采用LiCl抑制GSK3β，检测小檗碱对HCT116细胞增殖及细胞胞浆/核蛋白中β-catenin水平的影响。 6.采用RT-PCR方法，检测小檗碱对HCT116细胞β-catenin表达的影响。 实验结果： 1.小檗碱抑制HCT116细胞增殖，诱导其凋亡，并促使细胞发生G1期周期阻滞。 2.小檗碱抑制Wnt/β-catenin信号通路信号转导活性。 3.小檗碱降低HCT116细胞总蛋白和胞浆/核蛋白中β-catenin蛋白水平，以及下游目的基因的表达。 4.外源性过表达β-catenin减弱小檗碱对HCT116增殖的抑制作用，而沉默表达β-catenin能加强小檗碱对HCT116增殖的抑制作用。 5. GSK3β抑制剂LiCl不能逆转小檗碱对HCT116增殖的抑制作用以及胞浆/核蛋白中β-catenin蛋白水平的降低。 哪里 6.小檗碱明显抑制HCT116细胞中β-catenin mRNA表达。 实验结论： 小檗碱通过抑制HCT116细胞增殖、诱导凋亡和周期阻滞的作用与其抑制Wnt/β-catenin信号转导关系密切。其机制可能至少与小檗碱抑制HCT116细胞β-catenin mRNA表达有关。
目的：运用MALDI-TOF质谱技术平台检测横纹肌肉瘤中19个常见癌基因的突变位点与分布，并初步探讨其在横纹肌肉瘤发生发展中的意义。 方法：应用Sequenom MassArray技术结合OncoCarta突变试剂盒检测20例石蜡包埋横纹肌肉瘤（RMS）组织和2个细胞系(PLA802和RD)中19个常见癌基因238个突变位点的发生与分布，并分析其与RMS亚型、分级分期和生存状况的关系与意义；突变结果判读和数据统计学分析分别使用Typer4.0软件和SPSS17.0软件进行。 结果：（1）本组20例横纹肌肉瘤组织样本中5例（25%）检测到NRAS、KRAS和PIK3CA基因的突变，其中2例胚胎性RMS和1例腺泡状RMS均为NRAS_Q61K突变，而1例腺泡状RMS和1例多形性RMS样本中均检测到PIK3CA_Q546K突变，同时，在该例多形性RMS样本中还发现了KRAS_G12D突变的共同存在。（2）2例RMS细胞系中，1例胚胎性RMS检测到NRAS_Q61H突变，另1例腺泡状RMS则存在HRAS_Q61H和PIK3CA_E542K共突变。（3）RAS、PIK3CA或RAS/PIK3CA突变在不同分型、分级和分期的RMS之间无显著性差异（P>0.