6Ang(1-7)减少NOX和PKC的表达
提取肾小球蛋白,western blot检测显示NT组NOX4、p47phox、PKCβ1显著高于Control组,而Ang(1-7)剂量依赖性减少上述指标的表达,其大剂量的治疗作用与Ang(1-7)联合缬沙坦治疗作用相似,并且优于单纯缬沙坦治疗,A779治疗能阻断Ang(1-7)的作用。体外实验中Ang(1-7)对NOX4和p47phox的作用与动物实验一致。另外,我们分离了HBZY-1细胞膜蛋白和浆蛋白分别检测PKCa和PKCβ1在其中的含量,结果发现在浆蛋白中PKCa和PKCβ1在各组间无显著性差异,而在膜蛋白中,PKCα和PKCβ1的变化趋势与动物实验结果一致。 4.7Ang(1-7)减少TGFβ1Smad3和VEGF信号通路以及IV型胶原的表达 体内体外实验均发现,与Control组相比,NT组的TGFβ1蛋白表达和Smad3磷酸化水平均显著升高。Ang(1-7)、Valsartan和两者联合治疗均能抑制TGFβ1蛋白表达和Smad3的磷酸化水平,且Ang(1-7)的效应呈剂量依赖性,而A779能够阻断其作用。L-Ang(l-7)组和L+V两组的抑制作用强于Valsartan组,而两组间无显著性差异。我们又检测了HBZY-1细胞中VEGF和Ⅳ型胶原的蛋白表达,发现其变化趋势与TGFβ1的变化趋势一致。 4.8Ang(1-7)减少肾小球系膜细胞的增殖 EdU染色观察各组细胞间增殖水平,结果发现与Control组相比,HG组的EdU阳性细胞百分比显著升高。Ang(1-7)、Valsartan和两者联合治疗均能减少EdU阳性细胞比例,且Ang(1-7)的效应呈剂量依赖性,而A779能够阻断其作用。L-Ang(1-7)和L+V两组的抑制作用强于Valsartan组,而两组间无显著性差异。
KU-0063794分子重量 更多 5结论 (1)Ang(1-7)剂量依赖性改善STZ诱导的糖尿病肾病,大剂量Ang(1-7)的肾脏保护作用优于缬沙坦治疗。两药联合应用未发现明显协同效应。 (2)Ang(1-7)介导的肾脏保护机制包括Ang(1-7)减轻NOXs和PKCs介导的氧化应激并抑制TGFβ1Smad3和VEGF信号通路。
研究背景 肿瘤相关巨噬细胞(TAM)是肿瘤间质中数量最多的炎症细胞群体,TAM的浸润在卵巢癌等许多肿瘤发展及转移中扮演着重要角色。TAM受肿瘤微环境影响,常表现为M2型,可分泌生长因子、蛋白水解酶、促血管生长因子及免疫抑制因子等。TAM可通过促血管和淋巴管形成、细胞外基质重建、抑制抗肿瘤免疫反应等促进肿瘤进展。研究表明,TAM与乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌和宫颈癌等肿瘤的预后不良密切相关。TAM来源于外周血单核细胞,暴露在肿瘤微环境中,持续受到肿瘤微环境的影响。研究发现,TAM不仅富集在血管丰富的组织中,在缺氧的组织中也有较高的密度,这种现象在乳腺癌,膀胱癌等肿瘤中存在,但导致这种现象的机制还不清楚。5-LOX是脂氧合酶家族重要的一员,5-LOX代谢产物主要有5-HETE和白三烯等,对巨噬细胞有很强的趋化和促侵袭作用。本研究将探讨缺氧卵巢细胞促进肿瘤相关巨噬细胞浸润的机制,为卵巢癌提供新的治疗策略。 目的 肿瘤相关巨噬细胞在卵巢癌等许多肿瘤发展及转移中扮演着重要角色。肿瘤相关巨噬细胞不仅富集在血管丰富的组织中,在缺氧的组织中有较高的密度,但是导致这种现象的机制还不清楚。本研究将探讨缺氧卵巢细胞促进巨噬细胞浸润的机制。 方法 1.通过免疫组化检测分析5-LOX、HIF-1α和CD68(巨噬细胞)在卵巢癌组织中的表达。 2.分析5-LOX、HIF-1α和CD68(巨噬细胞)的表达与患者临床病理学参数的相关性。 3.采用qRT-PCR, Western blotting、ELISA等方法检测缺氧对卵巢癌细胞5-LOX通路相关蛋白及代谢产物的影响。 4.采用transwell小室检测缺氧卵巢癌细胞5-LOX代谢产物对巨噬细胞迁移与侵袭的影响。
5.采用qRT-PCR、Western blotting、免疫荧光等方法检测5-LOX代谢产物对巨噬细胞MMP-7表达的影响。 6.采用Western blotting检测5-HETE/LTB4上调巨噬细胞MMP-7表达的信号通路。 哪里 7.采用ELISA方法检测5-LOX代谢产物对巨噬细胞分泌TNF-a和HB-EGF的影响。 8.采用裸鼠卵巢癌移植瘤模型,验证齐留通(Zileuton)对肿瘤相关巨噬细胞浸润和MMP-7表达的影响。采用免疫组化及免疫荧光方法检测移植瘤中F4/80、5-LOX、HIF-1α和MMP-7的表达。 结果 1.人卵巢癌组织中5-LOX与HIF-la的表达水平与肿瘤相关巨噬细胞数量具有明显的相关性 为了研究人卵巢癌组织中5-LOX与HIF-1α的表达与肿瘤相关巨噬细胞数量的相关性,我们用免疫组化方法检测了5-LOX、HIF-1α及CD68(肿瘤相关巨噬细胞)在人卵巢癌组织中的表达。通过分析发现,5-LOX的表达与HIF-1α的水平具有明显的相关性,CD68(肿瘤相关巨噬细胞)的水平与5-LOX、HIF-1α的表达具有明显的相关性。这些结果说明人卵巢癌组织中5-LOX与HIF-1α的表达及肿瘤相关巨噬细胞数量具有明显的相关性。在卵巢癌缺氧区域(即HIF-1α高表达区域),5-LOX呈高表达水平,并且肿瘤相关巨噬细胞数量较多。 2.5-LOX表达水平及肿瘤相关巨噬细胞的数量与卵巢癌分期和转移具有相关性 为了研究人卵巢癌组织中5-LOX的表达水平及肿瘤相关巨噬细胞数量与卵巢分期和转移具有相关性,我们分析了人卵巢癌标本5-LOX、HIF-1α及CD68(肿瘤相关巨噬细胞)的表达水平与临床病理学参数的相关性。结果发现,HIF-1α、5-LOX和CD68的表达水平与卵巢癌Figo分期、转移具有明显的相关性,除此之外,CD68与卵巢癌淋巴结转移有明显相关性。这些结果表明人卵巢癌组织中5-LOX的表达水平及肿瘤相关巨噬细胞数量与卵巢癌分期、转移具有明显相关性。 3.